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Extracción de ADN de una célula

Extracción de ADN de una célula


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Quizás una pregunta estúpida, pero ¿qué sucede si uno elimina completamente el ADN de un organismo de una sola célula? Hasta donde yo sé, el ADN solo es necesario para propagar información a los descendientes, ya que se extrae de una célula adulta y se coloca una fuente artificial de proteína allí, ¿perderá la capacidad de aparearse o morirá de inmediato?


Eso depende del estado y la actividad de la célula. Los glóbulos rojos purgan su núcleo y contenido de ADN y continúan desempeñando su función bastante bien, aunque pierden su capacidad de dividirse y formar nuevas células (es decir, se diferencian terminalmente). La mayoría de las células, sin embargo, requieren que el genoma transcriba y traduzca la información genética en proteínas para mantener sus actividades metabólicas y funcionales. Como usted dice, también se necesitaría ADN para dividirse y construir nuevas células, por lo que sería una desventaja importante de eliminar todo el ADN. La adición de proteínas o aminoácidos exógenos no ayudará a garantizar la producción y el mantenimiento correctos de las proteínas, porque las proteínas están codificadas por ARNm que actúan como transcripciones móviles de ADN. Dependen de la transcripción del ADN, sin la cual no pueden existir. Las proteínas no se forman espontáneamente. En pocas palabras, el ADN es casi siempre absolutamente esencial, y se da el caso de que si se eliminara el núcleo de la mayoría de las células, morirían poco después.


Métodos de transferencia genética: 6 métodos

Este artículo arroja luz sobre los seis métodos de transferencia de genes. Los seis métodos son: (1) Transformación (2) Conjugación (3) Electroporación (4) Transferencia de genes mediada por liposomas (5) Transducción y (6) Transferencia directa de ADN.

Método # 1. Transformación:

La transformación es el método de introducir ADN extraño en células bacterianas (por ejemplo, E. coli). La absorción de ADN plasmídico por E. coli se lleva a cabo en CaCl helado2 (0-5 ° C) y un posterior choque térmico (37-45 ° C durante aproximadamente 90 segundos). Mediante esta técnica, la frecuencia de transformación, que se refiere a la fracción de la población celular que se puede transferir, es razonablemente buena, p. aproximadamente una celda por 1000 (10 -3) celdas.

Eficiencia de transformación:

Se refiere al número de transformantes por microgramo de ADN añadido. Para E. coli, transformación por plásmido, la eficiencia de transformación es de aproximadamente 107 a 108 células por microgramo de ADN plasmídico intacto. Las células bacterianas que pueden absorber ADN se consideran competentes. La competencia se puede mejorar modificando las condiciones de crecimiento.

El mecanismo del proceso de transformación no se comprende completamente. Se cree que el CaCI2 afecta la pared celular, se rompe en regiones localizadas y también es responsable de la unión del ADN a la superficie celular. Un breve choque térmico (es decir, el aumento repentino de la temperatura de 5 ° C a 40 ° C) estimula la captación de ADN. En general, los ADN de gran tamaño son menos eficientes en la transformación.

Otros métodos químicos de transformación:

Fosfato de calcio (en lugar de CaCI)2) se prefiere para la transferencia de ADN a células cultivadas. A veces, el fosfato de calcio puede provocar un precipitado y toxicidad para las células. Algunos trabajadores utilizan dietil amino etil dextrano (DEAE -dextrano) para la transferencia de ADN.

Método # 2. Conjugación:

La conjugación es un proceso de recombinación microbiana natural. Durante la conjugación, dos bacterias vivas (un donante y un receptor) se unen, se unen mediante puentes citoplasmáticos y transfieren ADN monocatenario (del donante al receptor). Dentro de la célula receptora, el nuevo ADN puede integrarse con el cromosoma (bastante raro) o puede permanecer libre (como es el caso de los plásmidos).

La conjugación puede ocurrir entre las células de diferentes géneros de bacterias (por ejemplo, células de Salmonella y Shigella). Esto contrasta con la transformación que tiene lugar entre las células de un género bacteriano. Por tanto, mediante conjugación, es posible la transferencia de genes de dos bacterias diferentes y no relacionadas.

El fenómeno natural de la conjugación se aprovecha para la transferencia de genes. Esto se logra transfiriendo ADN de inserción de plásmido de una célula a otra. En general, los plásmidos carecen de funciones conjugativas y, por lo tanto, no son capaces de transferir ADN a las células receptoras. Sin embargo, se pueden preparar y usar algunos plásmidos con propiedades conjugativas.

Método # 3. Electroporación:

La electroporación se basa en el principio de que los pulsos eléctricos de alto voltaje pueden inducir la fusión de las membranas plasmáticas de las células. Por tanto, la electroporación es una técnica que implica la permeabilización de la membrana mediada por un campo eléctrico. Las descargas eléctricas también pueden inducir la absorción celular de ADN exógeno (que se cree que es a través de los poros formados por pulsos eléctricos) de la solución de suspensión.

La electroporación es una técnica simple y rápida para introducir genes en las células de varios organismos (microorganismos, plantas y animales).

La técnica básica de electroporación para transferir genes a células de mamíferos se muestra en la figura 6.11. Las células se colocan en una solución que contiene ADN y se someten a descargas eléctricas para causar agujeros en las membranas. Los fragmentos de ADN extraños ingresan a través de los orificios al citoplasma y luego al núcleo.

La electroporación es una forma eficaz de transformar células de E. coli que contienen plásmidos con ADN insertado de más de 100 kb. La eficiencia de transformación es de aproximadamente 10 9 transformantes por microgramo de ADN para plásmidos pequeños (aproximadamente 3 kb) y aproximadamente 10 6 para plásmidos grandes (aproximadamente 130 kb).

Método # 4. Transferencia de genes mediada por liposomas:

Los liposomas son moléculas de lípidos circulares, que tienen un interior acuoso que puede transportar ácidos nucleicos. Se han desarrollado varias técnicas para encapsular ADN en liposomas. La transferencia de genes mediada por liposomas, denominada lipofección, se muestra en la figura 6.12.

En el tratamiento del fragmento de ADN con liposomas, las piezas de ADN se encapsulan dentro de los liposomas. Estos liposomas pueden adherirse a las membranas celulares y fusionarse con ellas para transferir fragmentos de ADN. Por lo tanto, el ADN ingresa a la célula y luego al núcleo. Los liposomas cargados positivamente se completan de manera muy eficiente con el ADN, se unen a las células y transfieren el ADN rápidamente.

La lipofección es una técnica muy eficaz y se utiliza para la transferencia de genes a células bacterianas, animales y vegetales. T

Método # 5. Transducción:

A veces, el ADN extraño se puede empaquetar dentro de virus animales. Estos virus pueden infectar naturalmente las células e introducir el ADN en las células huésped. La transferencia de ADN mediante este enfoque se denomina transducción.

Método # 6. Transferencia directa de ADN:

Es posible transferir directamente el ADN al núcleo celular. La microinyección y el bombardeo de partículas son las dos técnicas comúnmente utilizadas para este propósito.

La transferencia de ADN por microinyección se usa generalmente para las células cultivadas. Esta técnica también es útil para introducir ADN en células grandes como ovocitos, óvulos y células de embriones tempranos. El término transfección se usa para transferir ADN a células eucariotas, por diversos medios físicos o químicos.


37 Cómo se organiza el ADN en una célula

El ADN es una molécula de trabajo que debe replicarse (copiarse) cuando una célula está lista para dividirse, y debe "leerse" para producir las moléculas, como las proteínas, para llevar a cabo las funciones de la célula. Por esta razón, el ADN está protegido y empaquetado de formas muy específicas. Debido a que deben transportar tanta información, las moléculas de ADN pueden ser muy largas. Estiradas de un extremo a otro, las moléculas de ADN en una sola célula humana llegarían a una longitud de aproximadamente 2 metros (aproximadamente 6 pies). Por lo tanto, el ADN de una célula debe empaquetarse de una manera muy ordenada para encajar y funcionar dentro de una estructura (la célula) que no es visible a simple vista.

El complemento completo de ADN de una célula se denomina genoma. En los procariotas (bacterias), el genoma está compuesto por una molécula de ADN de doble hebra simple en forma de bucle o círculo. La región de la célula que contiene este material genético se llama nucleoide (Figura 1). Algunos procariotas también tienen bucles más pequeños de ADN llamados plásmidos que no son esenciales para el crecimiento normal.

Figura 1 Una célula procariota promedio. Tenga en cuenta que el ADN no está rodeado por una membrana para crear un núcleo. Crédito de la foto de Lady of Hats en Wikipedia.

El tamaño del genoma en uno de los procariotas mejor estudiados, Escherichia coli, es 4,6 millones de pares de bases. Esto extendería una distancia de aproximadamente 1,6 mm si se estira. Compare eso con la longitud de una célula de E. coli, que mide aproximadamente 1-2 μm de largo. 1,6 mm = 1600 μm: entonces, ¿cómo encaja todo este ADN dentro de una célula diminuta? El ADN se retuerce más allá de la doble hélice en lo que se conoce como superenrollamiento. Se sabe que algunas proteínas están involucradas en el superenrollamiento de otras proteínas y las enzimas ayudan a mantener la estructura superenrollada.

Los eucariotas, como los animales y las plantas, tienen cromosomas que constan de moléculas de ADN lineales. Los cromosomas pueden verse como estructuras filiformes ubicadas dentro del núcleo de las células eucariotas. Cada cromosoma está hecho de proteína y una única doble hélice lineal de ADN (Figura 2). El término cromosoma proviene de las palabras griegas para color (croma) y cuerpo (soma). Los científicos le dieron este nombre a los cromosomas porque son estructuras celulares, o cuerpos, que están fuertemente teñidos por algunos tintes de colores utilizados en la investigación.

Figura 2 Cromosomas lineales de las glándulas salivales de larvas de mosquito que no pican. Crédito de la foto Joseph Resichig Wikimedia.

Los eucariotas suelen tener mucho más ADN que los procariotas: el genoma humano es aproximadamente 3 mil millones pares de bases mientras que el genoma de E. coli es aproximadamente 4 millón.Por esta razón, los eucariotas emplean un tipo diferente de estrategia de empaquetamiento para encajar su ADN dentro del núcleo (figura 3). En el nivel más básico, el ADN está envuelto alrededor de proteínas conocidas como histonas. El ADN envuelto alrededor de las histonas se envuelve y se acumula a través de varios niveles adicionales de complejidad. Estas estructuras más gruesas y compactas son lo que ha visto antes en imágenes etiquetadas como "cromosomas".

figura 3: La estructura básica de los cromosomas eucariotas dentro del núcleo de una célula (& # 8220Chromosomes & # 8221 por el National Human Genome Research Instituteis en el dominio público)

  • Los procariotas tienen cantidades relativamente pequeñas de ADN (millones de pares de bases) que se encuentran en un genoma circular, que se encuentra en el citoplasma del nucleoide.
  • Los eucariotas tienen mayores cantidades de ADN (miles de millones de pares de bases) que se encuentran en varios cromosomas lineales, que se encuentran dentro del núcleo.

Respuestas y respuestas

Una vez que conozca la secuencia que rodea a su gen favorito, podrá encontrar sitios de restricción que lo rodeen y escindir el gen. Luego, puede tomar este gen extirpado y ligarlo a un vector receptivo (como un plásmido bacteriano).

Dependiendo de las enzimas de restricción que utilizó originalmente (hay miles de ellas), su gen tendrá nucleótidos sobresalientes en sus extremos. Usando estos extremos "pegajosos", hace coincidir el gen con un vector con extremos pegajosos complementarios. Se usa una ligasa para cementar el esqueleto de fosfato del gen al plásmido.


Tu gen
TACANNNNCGA
. GTNNNNGCTCG

(Ignore los puntos, el formato no funcionará si uso espacios. N = cualquier nucleótido)

Observe el saliente TA- y -CG.
El TA se unirá naturalmente a un vector preparado con un voladizo de AT
El CG se unirá naturalmente a un vector preparado con un voladizo de GC

Entonces, un vector (como un plásmido bacteriano) está hecho para tener proyecciones complementarias y el gen se empareja automáticamente con él.

Circular -NNN. TACANNNNCGA. GCNNN- Circular
Plásmido -NNNAT. GTNNNNGCTCG. NNN- Plásmido

(Nuevamente ignore los puntos, trátelos como espacios en blanco)

La ADN ligasa se usa para conectar la estructura de fosfato (no se muestra en este ejemplo simple) y la ligasa completa el ADN circular para que no haya mellas en el ADN (lo que lo debilitaría).

Ahora, este plásmido que lleva su gen puede ser reconocido por las bacterias y, a medida que la célula se divide, las bacterias duplicarán el gen (y el plásmido) con cada división. En un período de tiempo muy corto, tendrá miles de millones de estos genes.

No estoy familiarizado con la genética vegetal, pero como mencioné anteriormente, hay literalmente miles de sitios de restricción (en genética animal), por lo que la enzima utilizada depende del tamaño del fragmento de gen que desee.


La evidencia de ADN se puede fabricar, muestran los científicos

Los científicos de Israel han demostrado que es posible fabricar pruebas de ADN, lo que socava la credibilidad de lo que se ha considerado el estándar de oro de la prueba en casos penales.

Los científicos fabricaron muestras de sangre y saliva que contenían ADN de una persona que no era el donante de sangre y saliva. También demostraron que si tuvieran acceso a un perfil de ADN en una base de datos, podrían construir una muestra de ADN para que coincida con ese perfil sin obtener ningún tejido de esa persona.

“Simplemente se puede diseñar la escena del crimen”, dijo Dan Frumkin, autor principal del artículo, que ha sido publicado en línea por la revista Forensic Science International: Genetics. "Cualquier estudiante de biología podría realizar esto".

El Dr. Frumkin es uno de los fundadores de Nucleix, una empresa con sede en Tel Aviv que ha desarrollado una prueba para distinguir las muestras de ADN reales de las falsas que espera vender a los laboratorios forenses.

La colocación de pruebas de ADN fabricadas en la escena del crimen es solo una de las implicaciones de los hallazgos. Una posible invasión de la privacidad personal es otra.

Usando algunas de las mismas técnicas, es posible extraer el ADN de cualquier persona de una taza para beber o una colilla de cigarrillo desechadas y convertirla en una muestra de saliva que podría enviarse a una empresa de pruebas genéticas que mida la ascendencia o el riesgo de contraer diversas enfermedades. Las celebridades pueden tener que temer a los "paparazzi genéticos", dijo Gail H. Javitt del Centro de Genética y Políticas Públicas de la Universidad Johns Hopkins.

Tania Simoncelli, asesora científica de la Unión Estadounidense de Libertades Civiles, dijo que los hallazgos eran preocupantes.

“El ADN es mucho más fácil de plantar en la escena del crimen que las huellas dactilares”, dijo. "Estamos creando un sistema de justicia penal que depende cada vez más de esta tecnología".

John M. Butler, líder del proyecto de pruebas de identidad humana en el Instituto Nacional de Estándares y Tecnología, dijo que estaba "impresionado por lo bien que pudieron fabricar los perfiles de ADN falsos". Sin embargo, agregó, "creo que un criminal promedio no podría hacer algo así".

Los científicos fabricaron muestras de ADN de dos formas. Uno requería una muestra de ADN real, aunque pequeña, tal vez de un mechón de cabello o de una taza para beber. Amplificaron la pequeña muestra en una gran cantidad de ADN utilizando una técnica estándar llamada amplificación del genoma completo.

Por supuesto, se puede dejar una taza para beber o un mechón de cabello en la escena del crimen para incriminar a alguien, pero la sangre o la saliva pueden ser más creíbles.

Los autores del artículo tomaron sangre de una mujer y la centrifugaron para eliminar los glóbulos blancos, que contienen ADN. A los glóbulos rojos restantes, agregaron ADN que había sido amplificado a partir del cabello de un hombre.

Dado que los glóbulos rojos no contienen ADN, todo el material genético de la muestra de sangre fue del hombre. Los autores lo enviaron a un importante laboratorio forense estadounidense, que lo analizó como si fuera una muestra normal de sangre de un hombre.

La otra técnica se basaba en perfiles de ADN, almacenados en bases de datos policiales como una serie de números y letras correspondientes a variaciones en 13 puntos del genoma de una persona.

A partir de una muestra combinada del ADN de muchas personas, los científicos clonaron pequeños fragmentos de ADN que representan las variantes comunes en cada lugar, creando una biblioteca de dichos fragmentos. Para preparar una muestra de ADN que coincida con cualquier perfil, simplemente mezclaron los fragmentos adecuados. Dijeron que una biblioteca de 425 fragmentos de ADN diferentes sería suficiente para cubrir todos los perfiles imaginables.

La prueba de Nucleix para saber si se ha fabricado una muestra se basa en el hecho de que el ADN amplificado, que se usaría en cualquiera de los dos engaños, no está metilado, lo que significa que carece de ciertas moléculas que están unidas al ADN en puntos específicos, generalmente para inactivar genes.


CRISPR en animales y modelos animales

4.5 Extracción de ADN y amplificación de bibliotecas

Los pasos de extracción de ADN y amplificación por PCR a menudo se pasan por alto como aspectos de las pantallas CRISPR, ya que son técnicas de laboratorio comunes. Sin embargo, estos pasos se realizan a una escala mayor que la que suele realizar el investigador promedio, lo que presenta desafíos únicos. Dado que muchos aspectos de este paso no se pueden evaluar fácilmente para el control de calidad hasta después de la secuenciación de la biblioteca, puede llevar mucho tiempo y ser un desperdicio de optimizar. Por lo tanto, se recomienda encarecidamente utilizar protocolos publicados. 53

La extracción de ADN genómico limpio y de alta calidad de grandes cantidades de tejido tumoral es esencial. El ADN tumoral utilizado para la amplificación por PCR debe estar libre de inhibidores de la PCR o contaminantes que puedan impedir la determinación precisa de la concentración de ADN. El enfoque utilizado también debe ser compatible con el procesamiento de grandes cantidades de material de partida, lo que favorece la aplicación de una técnica basada en la precipitación, pero también debe tenerse en cuenta que el arrastre debe minimizarse.

Se debe prestar atención a minimizar la carga de ADN en la muestra antes de la amplificación. El ADN de carga es la masa de ADN que se deriva de tejidos distintos de las células cancerosas de interés. En el caso de los xenoinjertos de flanco, el ADN de carga irrelevante de origen estromal murino puede constituir más de la mitad de los ácidos nucleicos totales. 87 Deben realizarse esfuerzos para eliminar este estroma infiltrante. 88 En los GEMM, las células tumorales, a menudo decenas o cientos de lesiones distintas, se mezclan con el parénquima de órganos normales. Se recomienda marcar estas células con un marcador fluorescente para la clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) para obtener una población de células tumorales pura. 89


Extracción de ADN - Fresa

Las fresas son octoploides, lo que significa que tienen ocho juegos de cromosomas. El procedimiento para extraer ADN de una fresa es simple y los resultados suelen ser obvios, es fácil ver las hebras blancas de ADN dentro de la solución rosada de jugo de fresa.

En este procedimiento, triturará una fresa y agregará detergente y sal para romper las paredes celulares y liberar el ADN dentro del núcleo. Luego, filtrará el líquido de esta fresa triturada en un vaso de precipitados, la sustancia se llama filtrado. A continuación, se vierte el filtrado en un tubo de ensayo y se vierte una capa de alcohol por encima. Luego, el ADN se precipitará en la capa de alcohol en un tubo de ensayo.

  • Extraer ADN de una fresa usando productos domésticos
  • Identificar el papel de las sustancias químicas en el proceso de extracción de ADN.
  • Observe una gran muestra de ADN.

Materiales necesitados:

  • Tampón de extracción de ADN: 1000 ml de agua desionizada, 50 ml de detergente para platos transparente, 1 cucharadita de sal
  • Fresa (otras frutas también funcionan)
  • Bolsa con cierre hermético
  • Filtros y embudos de café
  • Tubos de ensayo, vasos de precipitados o tazas para recoger el filtrado.

1. Agregue una fresa (o la mitad) a un almacenamiento Ziploc.
2. Agregue 10 ml del tampón de extracción de ADN y triture la fresa y el tampón durante aproximadamente un minuto.
3. Utilice un embudo y filtros de café para filtrar el jugo de fresa en un vaso de precipitados.
4. Transfiera el filtrado a un tubo de ensayo, solo debe llenar el tubo de ensayo hasta la mitad y evitar la transferencia de espuma.
5. Vierta lentamente o gotee alcohol frío sobre la parte superior de la mezcla de fresas. Quieres una sola capa encima de la mezcla de fresas.
6. Se formarán hebras blancas en la capa de etanol, use una varilla para remover las hebras.

Preguntas de discusión

1. ¿Cómo se ve el ADN de la fresa?

2. ¿Por qué es importante que los científicos puedan eliminar el ADN de las células?

3. ¿Cuál es el papel del detergente, el etanol y la sal en el proceso de extracción?

4. ¿Cuál es la diferencia entre el filtrado y el precipitado?

4. ¿Hay ADN en su comida? ¿Cómo lo sabes? ¿Por qué no te daña (o altera) la ingestión del ADN de otro organismo?

/> Este trabajo está sujeto a una licencia internacional Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir igual 4.0.


Herramienta de edición de genes de Harvard y quotsneaks & quot ADN en las células sin hacer cortes

CRISPR-Cas9 es una herramienta revolucionaria de edición de genes, pero no está exenta de desventajas. Ahora, los científicos de Harvard han demostrado un sistema de ingeniería genética alternativo llamado Retron Library Recombineering (RLR), que funciona sin cortar el ADN y se puede aplicar rápidamente a grandes poblaciones de células.

CRISPR funciona como un par de tijeras genéticas, capaz de realizar ediciones precisas de cortar y pegar en el genoma de las células vivas. El sistema puede buscar una secuencia de ADN en particular, luego usa una enzima, más comúnmente Cas9, para hacer un corte allí. A medida que la célula realiza sus procedimientos de reparación de ADN, CRISPR le indica que use una secuencia diferente en lugar de la original, editando así el genoma.

Este sistema ya está demostrando ser invaluable en una variedad de aplicaciones, desde el tratamiento de enfermedades como el cáncer, el VIH y la distrofia muscular, hasta el control de plagas, la mejora de los cultivos y la construcción de computadoras biológicas a partir de bacterias.

Sin embargo, existen problemas potenciales. Cortar el ADN podría causar algunos efectos secundarios no deseados, y se ha planteado la preocupación de que CRISPR pueda realizar ediciones en la sección incorrecta del genoma. También puede ser un poco complicado escalar para realizar grandes cantidades de ediciones a la vez y rastrear qué mutantes están teniendo qué efecto en las pruebas de laboratorio.

La nueva tecnología de edición de genes, de investigadores de la Escuela de Medicina de Harvard y el Instituto Wyss, intenta resolver estos problemas. El principal punto de diferencia de RLR es que no corta el ADN en absoluto, sino que introduce el nuevo segmento de ADN mientras una célula replica su genoma antes de dividirse.

Un esquema que ilustra cómo funciona la nueva técnica de edición de genes Retron Library Recombineering (RLR)

Lo hace mediante retrones, que son segmentos de ADN bacteriano que producen fragmentos de ADN monocatenario (ssDNA). Esto, resulta, fue originalmente un mecanismo de autodefensa que las bacterias usan para verificar si han sido infectadas con un virus.

Al agregar tanto el segmento de ADN deseado junto con una proteína de hibridación monocatenaria (SSAP), el sistema RLR se asegura de que el segmento de ADN deseado termine en el genoma de la célula hija, después de que la célula original se divida.

“Pensamos que los retrones deberían darnos la capacidad de producir ssDNA dentro de las células que queremos editar en lugar de intentar forzarlos a entrar en la célula desde el exterior y sin dañar el ADN nativo, que eran cualidades muy convincentes”, dice Daniel. Goodman, coautor del estudio.

El nuevo sistema también tiene algunas otras ventajas. Se escala bien, lo que permite que se produzcan millones de mutaciones a la vez, y la proporción de células editadas aumenta con el tiempo a medida que las células se replican. La secuencia de retroceso también se puede rastrear como un "código de barras", lo que permite a los científicos verificar fácilmente qué células recibieron qué edición, al intentar estudiar los efectos.

Retron Library Recombineering (RLR) podría acelerar los experimentos de laboratorio sobre mutaciones genéticas en bacterias

Para probar el sistema, los investigadores lo pusieron a trabajar editando poblaciones de E. coli. Utilizaron los retrones para introducir genes de resistencia a los antibióticos en las bacterias, y después de hacer algunos otros ajustes a los insectos para evitar que repararan los "errores" del ADN, encontraron que más del 90 por ciento de la población incorporó la secuencia deseada después de 20 generaciones. Y gracias a la naturaleza del código de barras de los retrones, el equipo pudo rastrear fácilmente qué ediciones habían transferido los genes deseados al genoma bacteriano.

Si bien todavía queda mucho trabajo por hacer, el equipo dice que la nueva herramienta RLR podría tener una variedad de aplicaciones. A corto plazo, podría ser una nueva herramienta poderosa para estudiar genomas y mutaciones bacterianas, lo que podría ayudar a crear nuevas cepas beneficiosas o descubrir opciones de tratamiento para problemas como la resistencia a los antibióticos. A largo plazo, puede conducir a una alternativa más segura a CRISPR en otros organismos, incluso en humanos.

“Ser capaz de analizar bibliotecas de mutantes agrupadas con códigos de barras con RLR permite realizar millones de experimentos simultáneamente, lo que nos permite observar los efectos de las mutaciones en todo el genoma, así como cómo esas mutaciones pueden interactuar entre sí”, dice George Church, autor principal del estudio. "Este trabajo ayuda a establecer una hoja de ruta hacia el uso de RLR en otros sistemas genéticos, lo que abre muchas posibilidades interesantes para la investigación genética futura".


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¿Cuál es el propósito de la sal en la extracción de ADN?

Durante la extracción de ácido desoxirribonucleico, o ADN, se añaden típicamente compuestos de sal como acetato de sodio y acetato de amonio para ayudar en la eliminación de proteínas asociadas al ADN. Otro tipo de compuesto de sal llamado cloruro de sodio, o NaCl, ayuda a solidificar y hacer visible el ADN. Cuando se mezcla en una solución de alcohol, el componente de sodio de NaCl proporciona una barrera protectora alrededor de los extremos de fosfato de ADN cargados negativamente, lo que les permite acercarse para ser extraídos de la solución.

La extracción de ADN es el proceso de obtener ADN puro de una muestra, ya sea de células vivas o no vivas, como las que se encuentran en los virus. Esta técnica se usa comúnmente en el campo médico, donde la detección temprana de enfermedades y trastornos aumenta significativamente las tasas de supervivencia de las personas afectadas.

El método inicialmente requiere la lisis de las células que contienen el ADN que se va a extraer. Las células se desintegran al someter la muestra a oscilaciones ultrasónicas o al batir las perlas. La muestra se agrega con sal, que se centrifuga en una solución de fenol-cloroformo. A continuación, se extraen las moléculas de proteína asociadas. El ADN que queda después de la eliminación de las proteínas se mezcla con una solución de alcohol, típicamente isopropanol frío o etanol. La solución se centrifuga y el ADN, que no se disuelve en alcohol, se precipita y se extrae. Para aumentar la producción de ADN, todo el proceso debe realizarse en un ambiente frío.


Ver el vídeo: RNA Extraction Tutorial (Enero 2023).