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¿Cuándo se deben utilizar los inhibidores de la endocitosis en los ensayos de unión a células?

¿Cuándo se deben utilizar los inhibidores de la endocitosis en los ensayos de unión a células?


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Estoy empezando a hacer algunos ensayos de unión celular y me gustaría que mis proteínas no fueran endocitosadas por mis células de mamíferos. Las sugerencias típicas son que las células se mantengan en hielo y que el experimento de unión también se produzca cuando las células se enfrían.

Sin embargo, para estar seguro, se ha sugerido que utilice inhibidores de la endocitosis. Entonces, mis preguntas son, ¿cuándo son necesarios los inhibidores de la endocitosis? ¿Cómo puedo saber que los inhibidores de la endocitosis son necesarios? ¿Cuáles usaría realmente?

Reconozco que existen mecanismos de internalización tanto de clatrina como de no clatrina. ¿Qué mecanismo sería más útil de estudiar para una interacción anticuerpo-receptor?


Como tantas cosas, depende. Además, no estoy un poco claro cuando dice interacción anticuerpo-receptor, ¿quiere decir que tiene un anticuerpo que es específico para un receptor o que está estudiando la unión de los receptores Fc a los anticuerpos? (para lo siguiente, asumo lo primero)

Para la mayoría de los tipos de células y la mayoría de las moléculas de la superficie celular, la unión simple de anticuerpos no inducirá endocitosis, y mantener las células en hielo es suficiente para prevenir la mayoría de las endocitosis de fondo (también haría los ensayos en una habitación fría para que incluso cuando saca los tubos del cubo de hielo, se mantienen fríos).

Por otro lado, si está utilizando células altamente fagocíticas (como macrófagos) y / o está activando un receptor a través de enlaces cruzados o algún otro mecanismo, es posible que tenga una endocitosis que afecte sus resultados.

El mecanismo (clatrina frente a no) también puede variar, nuevamente dependiendo de lo que se esté atando.

Debe realizar alguna optimización, es decir, realizar el mismo ensayo en un conjunto de muestras, con o sin inhibición, y ver si la unión de su anticuerpo se ve afectada. Pero tenga en cuenta que muchos medicamentos para inhibir la endocitosis también pueden hacer otras cosas, así que tenga cuidado con los artefactos. Quizás lea esto: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18369934


Ver el vídeo: 3 ENDOCITOSIS Y EXOCITOSIS (Noviembre 2022).