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13.33: Sangre - Biología

13.33: Sangre - Biología


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¿Qué es exactamente la sangre?

Todas sus células necesitan oxígeno, ya que el oxígeno es el último aceptor de electrones durante la respiración celular. ¿Cómo obtienen este oxígeno? De sangre. Las células sanguíneas fluyen a través de los vasos del sistema circulatorio humano. Pero, ¿qué es exactamente la sangre? Transporta oxígeno, pero también tiene otras funciones.

Sangre

Sangre es un tejido conectivo fluido. Circula por todo el cuerpo a través de los vasos sanguíneos mediante la acción de bombeo del corazón. La sangre en las arterias transporta oxígeno y nutrientes a todas las células del cuerpo. La sangre en las venas transporta dióxido de carbono y otros desechos de las células para ser excretados. La sangre también defiende al cuerpo contra las infecciones, repara los tejidos corporales, transporta hormonas y controla el pH del cuerpo.

Composición de la sangre

La parte líquida de la sangre se llama plasma. Es un líquido acuoso de color amarillo dorado que contiene muchas sustancias disueltas y células sanguíneas. Los tipos de glóbulos en plasma incluyen glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas (ver Figura debajo).

Las células de la sangre incluyen glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas.

  • Los billones de las células rojas de la sangre en el plasma sanguíneo transportan oxígeno. Los glóbulos rojos contienenhemoglobina, una proteína con hierro que se une al oxígeno. Los glóbulos rojos se producen en la médula de los huesos largos, las costillas, el cráneo y las vértebras. Estas células sobreviven durante unos 120 días y luego se destruyen. Los glóbulos rojos maduros carecen de núcleo y otros orgánulos, lo que permite que cada célula transporte más hemoglobina y, por lo tanto, más oxígeno.
  • células blancas de la sangre son generalmente más grandes que los glóbulos rojos pero mucho menos en número. Defienden el cuerpo contra bacterias, virus y otros patógenos extraños. Por ejemplo, los glóbulos blancos llamados fagocitos tragan y destruyen microorganismos y desechos en la sangre, los neutrófilos engullen a las bacterias y otros parásitos, y los linfocitos combaten las infecciones causadas por bacterias y virus.
  • Plaquetas son fragmentos de células implicados en la coagulación sanguínea. Se adhieren a los desgarros en los vasos sanguíneos y entre sí, formando un tapón en el lugar de la lesión. También liberan sustancias químicas necesarias para que se produzca la coagulación.

Tipo de sangre es una característica genética asociada con la presencia o ausencia de ciertas moléculas, llamada antígenos, en la superficie de los glóbulos rojos. Los tipos de sangre más comúnmente conocidos son los tipos de sangre ABO y Rhesus.

  • Tipo de sangre ABO está determinada por dos antígenos comunes, a menudo denominados simplemente antígenos A y B. Una persona puede tener el tipo de sangre A (solo antígeno A), B (solo antígeno B), AB (ambos antígenos) u O (sin antígenos).
  • Tipo de sangre Rhesus está determinada por un antígeno común. Una persona puede tener el antígeno (Rh+) o carecen del antígeno (Rh-).

El tipo de sangre es importante por razones médicas. Una persona que necesita una transfusión de sangre debe recibir sangre del mismo tipo que la suya. De lo contrario, la sangre transfundida puede causar una reacción potencialmente mortal en el torrente sanguíneo del paciente.

Resumen

  • La sangre es un tejido conectivo fluido que contiene un componente líquido llamado plasma.
  • La sangre también contiene sustancias disueltas y glóbulos.
  • Los glóbulos rojos transportan oxígeno, los glóbulos blancos defienden el cuerpo y las plaquetas ayudan a que la sangre se coagule.

Revisar

  1. ¿Qué tipo de tejido es sangre?
  2. Identifica tres tipos de células sanguíneas y sus funciones.
  3. Las personas con sangre tipo O se denominan "donantes universales" porque pueden donar sangre a cualquier otra persona, independientemente de su tipo de sangre ABO. Explicar por qué.

Sistema de grupo sanguíneo H

Marion E. Reid PhD, FIBMS, DSc (Hon.),. Martin L.Olsson MD, PhD, en The Blood Group Antigen FactsBook (tercera edición), 2012

Bases moleculares del fenotipo H– en secreciones

Diferencias del FUT2 * 01 se dan el alelo de referencia (número de acceso U17894).

Nombre de aleloExónNucleótidoAminoácidosEtnia (prevalencia)
FUT2 * 01N.012244G y gtA 385A y gtTAla82Thr Ile129PheMongol (raro)
FUT2 * 01N.022428G y gtA ^ Trp143 DetenerEuropeos, africanos, iraníes (común)
FUT2 * 01N.032569G y gtAArg190HisTurco (raro)
FUT2 * 01N.042571C y GTTArg191 DetenerJaponés, filipino polinesio, taiwanés (raro)
FUT2 * 01N.052628C y GTTArg210 DetenerJaponés (raro)
FUT2 * 01N.062658C y GTTArg220 DetenerChino, taiwanés (raro)
FUT2 * 01N.072664C y GTTArg222CysNueva Guinea (raro)
FUT2 * 01N.082685_686delGT230fs234 ParadaTaiwanés (raro)
FUT2 * 01N.092688_690delGTCVal230delFilipino (raro)
FUT2 * 01N.102400G y gtA 760G y gtAVal134Ile Asp254AsnNueva Guinea (raro)
FUT2 * 01N.112778delC259fs275 DetenerSudafricano (raro)
FUT2 * 01N.122849G y gtATrp283 DetenerFilipino, taiwanés (raro)
FUT2 * 01N.132868G y gtAGly290ArgNueva Guinea (raro)
FUT2 * 01N.142950C y GTTPro317LeuMongol (raro)
FUT2 * 0N.01 deleción de genes Bangladesh (raro)
FUT2 * 0N.02 región de codificación eliminada ^^ Indio (varios)
FUT2 * 0N.03 gen de fusión 1 entre FUT2 y Sec1 Japonés (raro)
FUT * 0N.04 gen de fusión 2 entre FUT2 y Sec1 Mongol (raro)

Bioquímica de las interacciones mediadas por carbohidratos de glucoconjugados glicanos

3.03.10.1 α2-Fuc-transferasas

FUT1, codificado por el gen H en tejidos hematopoyéticos, y FUT2, codificado por el gen secretor Se en células epiteliales y secretoras de moco, sintetizan el determinante H (grupo sanguíneo O). 199,200 Tanto FUT1 como -2 actúan sobre el residuo Gal de norte-acetillactosaminas. Sin embargo, FUT2 prefiere la estructura del núcleo 1 como sustrato y, por lo tanto, es responsable de la síntesis del antígeno H en las mucinas. Debido a la especificidad de las Fuc-transferasas, el residuo Fucα1-2 se agrega al norte-acetillactosamina terminal antes de añadir un residuo Fucα1-3 o Fucα1-4 en la síntesis de determinantes de Lewis b o Lewis y (Figuras 4 y 5). La mayoría de las personas tienen el determinante H, pero en los raros fenotipos de Bombay y para-Bombay (Tabla 7), el determinante del grupo sanguíneo H está ausente debido a defectos en las α2-Fuc-transferasas. 201,202

La actividad de FUT1 aumenta en los tumores de colon y está asociada con la progresión del tumor. 203 Cuando FUT1 se transfectó en células REGb de carcinoma de colon de rata, las células se volvieron más agresivas y tumorigénicas en ratas singénicas, posiblemente debido a una mayor resistencia a la apoptosis. 204 ratones transgénicos FUT1 exhiben colitis y linfopenia junto con marcadores de células T aberrantes que podrían reconstituirse con trasplante de médula ósea de ratones de tipo salvaje. 205 Esto muestra que FUT1 está críticamente involucrado en el desarrollo de células T. Una deleción del gen FUT2 en ratones (Tabla 6) eliminó el epítopo Fucα1-2Gal en las mucinas gastrointestinales pero no indujo ninguna patología. 206 En ratones libres de gérmenes, se demostró que los microbios fecales orales inducen una alta expresión de FUT2 específicamente en el intestino delgado, lo que sugiere interacciones huésped-microbio como factor inductor. 207


Resultados y discusión

Para generar el Tbx1-GFP alelo, primero generamos un plásmido bacteriano que expresa una proteína de fusión Tbx1-GFP de aproximadamente 75 kilodaltons (kD) (Figura 1A), correspondiente a la masa combinada de Tbx1 (

27 kD) (Figura 1B). los Tbx1-GFP El fragmento se insertó aguas abajo de una secuencia de parada transcripcional de triple poliadenilación (tpA) que está flanqueada por sitios LoxP en el vector pBigT [13]. El elemento loxP-tpA-loxP-Tbx1-GFP se clonó en el vector pROSA26PA para apuntar al Rosa26 locus [13, 14], y se electroporaron en células madre embrionarias de ratón (ESC) WW6 (129 / SvJ). Identificamos 5/56 clones de ESC dirigidos correctamente mediante análisis de transferencia Southern (Figura 1C). Se eligió el clon 45 para la inyección de blastocisto en hembras C57BL6 para generar quimeras para la transmisión de la línea germinal.

Generación del Tbx1-GFP ratón. (A) Se insertó Tbx1-GFP en el sitio de clonación múltiple (MCS) de pBigT corriente abajo de una secuencia de poliadenilación triple (tpA) que está flanqueada por sitios LoxP (triángulos). La subclonación adicional en el plásmido pROSA26PA dio como resultado la construcción de dirección final. Los brazos de homología de 5 'y 3' median la recombinación con el endógeno Rosa26 lugar. (B) Lisados ​​de células completas de células COS7 transfectadas (T) con plásmido Tbx1-GFP o no transfectadas (UT). La proteína de fusión es de ~ 75 kD y es detectada por anti-GFP y anti-Tbx1 en Western blot. (C) Se usó transferencia Southern para cribar clones de ESC. El ADN genómico se linealizó con EcoRV y se hibridó con una sonda radiomarcada que se une corriente arriba del brazo de homología 5 '. Se muestran dos de los cinco clones positivos. El alelo dirigido correctamente es de 4.071 pb y el alelo de tipo salvaje es de 11.517 kb.

Para probar el Tbx1-GFP alelo, cruzamos Tbx1-GFP flox / flox ratones a Foxg1-Cre y Pax2-Cre ratones [15, 16] y analizaron sus respectivos fenotipos. Ambos controladores de Cre se han utilizado anteriormente para inactivar Tbx1 mediante la recombinación específica de tejidos de sitios loxP [11, 17]. Foxg1-Cre expresión se superpone con endógena Tbx1 expresión en tejidos como el aparato faríngeo y la vesícula ótica (VO) [11, 15, 17]. En el estudio presentado aquí, mostramos que Foxg1-Cre puede activar ectópicamente Tbx1-GFP en la placa olfativa, el prosencéfalo y la vesícula óptica, lo que da como resultado defectos morfológicos de estos tejidos durante el desarrollo (Figura 2A). Además, por E15.5, Foxg1-CreTbx1-GFP flox / + mutantes muestran aplasia tímica probablemente debido a la sobreexpresión de Tbx1-GFP en la 3ª bolsa faríngea y formación anormal de la prominencia nasal. Pax2-CreTbx1-GFP flox / + los mutantes son letales perinatales (Figura 2A).

Activación de Tbx1-GFP por Foxg1-Cre y Pax2-Cre . (A) Foxg1-CreTbx1-GFP flox / + los mutantes tienen aplasia tímica y malformaciones nasales en E15.5, y defectos oculares y faríngeos en E11.5. (B) Pax2-CreTbx1-GFP flox / + los mutantes mueren poco después del nacimiento. Tienen microcefalia y defectos oculares. Timo (T), corazón (H), pulmones (L), prosencéfalo (FB). (C) Relleno de pintura de los oídos internos en Pax2-CreTbx1-GFP flox / + y Foxg1-CreTbx1-GFP flox / + mutantes. El conducto endolinfático (DE) y el pilar común (CC) están agrandados. Faltan el canal semicircular lateral (LC), el utrículo (U) y el sáculo (S). La cóclea (C) se acorta en diversos grados. Los ratones BAC316.23 muestran similitudes en los defectos morfológicos del oído interno. Canal anterior (AC), canal posterior (PC). (D) ARN total en el lugar hibridación en E9.5 para NeuroD, expresado en neuroblastos de los ganglios craneales. La inmunohistoquímica Wholemount tiñe los ganglios sensoriales craneales con anti-neurofilamento (NF) en E10.5. Los paréntesis rojos indican placa olfativa. La vesícula ótica está rodeada de amarillo.

Dado que los defectos cardíacos y del oído interno son dos de las características más destacadas en el Tbx1 mutante nulo, decidimos examinar esas estructuras con más detalle en el Pax2-CreTbx1-GFP flox / + mutantes y Foxg1-CreTbx1-GFP flox / + mutantes, respectivamente. Foxg1-Cre y Pax2-Cre ambos se expresan fuertemente a lo largo del VO, a partir del cual se forma el oído interno. Tanto la pérdida como la ganancia de Tbx1 función en el OV interrumpe la morfogénesis del oído interno [5, 18, 19]. Relleno de pintura del oído interno en Foxg1-CreTbx1-GFP flox / + y Pax2-CreTbx1-GFP flox / + mutantes en E14.5 muestra un conducto endolinfático agrandado (DE) y un pilar común (CC) que se une a los canales semicirculares anterior y posterior (SCC) (Figura 2B). Faltan el utrículo, el sáculo y el SCC lateral. La cóclea es hipoplásica con grado variable, pero agrandada en dos casos (Figura 2B). Este fenotipo es muy similar al de los ratones transgénicos BAC316.23 [5] con la excepción de que los ratones BAC316.23 todavía poseen el SCC lateral, y en la mayoría de los casos el sáculo y el utrículo están presentes, aunque malformados (Figura 2B).

Tbx1 También se sabe que reprime la neurogénesis del VIII ganglio craneal que inerva el oído interno [19]. Aquí te mostramos que en Foxg1-CreTbx1-GFP flox / + mutantes, expresión de Factor de diferenciación neurogénica 1 (NeuroD) está casi abolido en el octavo ganglio craneal y muy atenuado en los ganglios craneales V, VII, IX y X (Figura 2C). La inmunohistoquímica con anti-neurofilamento confirmó la pérdida del VIII ganglio craneal y un tamaño anormal y proyecciones equivocadas de otros ganglios craneales en Foxg1-CreTbx1-GFP flox / + mutantes (Figura 2C). Además, encontramos que NeuroD la expresión está completamente ausente del placódigo olfativo de Foxg1-CreTbx1-GFP flox / + mutantes una región donde Foxg1-Cre está activo y no hay Tbx1 expresión en un contexto de tipo salvaje, lo que sugiere que la ganancia de función de Tbx1 en la placa olfativa conduce a la represión ectópica de NeuroD. Estos hallazgos demuestran que Tbx1 podría actuar directa o indirectamente sobre factores neurogénicos que son comunes a las placodas óticas y olfativas.

Examen de defectos de SCC en el Pax2-CreTbx1-GFP flox / + Los mutantes que usaban relleno de pintura revelaron un retraso en la formación de SCC en etapas de desarrollo anteriores (Figura 3A). En el tipo salvaje, la limpieza de las placas de fusión es visible por E12.25 y completa por E12.5 [20]. En Pax2-CreTbx1-GFP flox / + mutantes, las placas de fusión aún no se han unido en E12.25 aunque parecen recuperarse parcialmente por E14.5 (Figura 3A). Los cortes histológicos en E12.25 confirman que las placas de fusión en Pax2-CreTbx1-GFP flox / + los mutantes permanecen unidos al mesénquima periódico en comparación con los compañeros de camada de control (Figura 3A). Examinamos la expresión de laminina y netrin-1, una proteína secretada que está relacionada con las lamininas y promueve la degradación de la lámina basal [21, 22]. Observamos una disminución de los niveles de proteína laminina a lo largo del epitelio ótico, especialmente a lo largo del sitio de formación lateral de SCC junto con una disminución correspondiente en netrin-1 Expresión de ARNm a lo largo de las placas de fusión en Pax2-CreTbx1-GFP flox / + mutantes (Figura 3B). Es posible que Tbx1 puede actuar para reprimir netrin-1, modulando así las propiedades de adhesión celular. La complementación de estos resultados se produjo en Tbx1 −/− ratones nulos en los que la expresión de netrin-1 se expande en el mesénquima que rodea al OV (Figura 3C). No observamos expandido netrin-1 expresión en el VO de Tbx1 −/− ratones nulos, posiblemente debido a la gravedad del fenotipo OV y la subsiguiente ausencia de estructuras vestibulares.

Propiedades de adhesión celular alteradas en Tbx1 mutantes. (A) Relleno de pintura de los oídos internos de Pax2-CreTbx1-GFP flox / + mutantes en etapas progresivamente más tempranas de desarrollo revelan un retraso en la formación de SCC. En E12.25, las placas de fusión (flechas, FP) son visibles en los controles, pero no parece que se hayan formado en los mutantes. El análisis histológico confirma defectos en las placas de fusión (FP, flechas rojas). En los controles, se puede ver que el epitelio vestibular se ha separado del mesénquima (asteriscos). En Tbx1-GFP mutantes, no hay separación del epitelio del tejido circundante. (B) Inmunofluorescencia con anti-laminina (rojo). Las flechas indican la extensión del epitelio de la placa de fusión. Hay más laminina intacta en el Tbx1-GFP mutantes. ARN en el lugar hibridación a netrin-1 en secciones. Netrin-1 La expresión se reduce en las placas de fusión de Tbx1-GFP mutantes. Canal anterior (AC, canal lateral (LC). (C) Expresión de netrin-1 ARNm en tipo salvaje y Tbx1 −/− ratones nulos. Netrin-1 la expresión aumenta en el mesénquima que rodea el oído interno en ausencia de endógenos Tbx1.

Para probar si Tbx1-GFP podría rescatar defectos del oído interno que ocurren en Tbx1 Cre / - embriones nulos, cruzamos Tbx1-GFP flox / flox ratones a Tbx1 Cre / + ratones [23]. Tbx1 Cre / - Se ha demostrado que los ratones recapitulan la Tbx1 −/− fenotipo nulo [23]. Cuando se expresa Cre, las células del Tbx1 Cre / + expresando dominio son positivos para GFP de una manera que representa el Tbx1 linaje en el OV en embriones (Figura 4A). Expresión de Tbx1-GFP bajo el Rosa26 el promotor solo no es suficiente para la visualización directa de GFP natural, por lo tanto, se detectó la proteína Tbx1-GFP usando un anticuerpo contra GFP. Dado que la expresión de Tbx1-GFP es impulsado persistentemente por el endógeno Rosa26 promotor, esperamos el dominio de activado Tbx1-GFP ser más extenso que el nativo Tbx1 expresión (Figura 4A). La inmunofluorescencia con antisuero anti-GFP demostró que no hay proteína Tbx1-GFP en ausencia de expresión de Cre en el OV (Figura 4A). Tbx1 Cre / + Tbx1-GFP flox / + mutantes no exhibieron defectos morfológicos graves del oído interno basados ​​en el relleno de pintura (Figura 4B), tal vez porque un alelo de Tbx1 se elimina por knock-in de Cre. Paintfilling confirmó que los oídos internos de Tbx1 −/− los ratones nulos carecen de todas las estructuras vestibulares y auditivas discernibles con la excepción de lo que parece ser un DE agrandado (Figura 4C). Cuando un solo alelo de Tbx1-GFP se activa en un Tbx1 Cre / - En el fondo, hay rescate de los CCE anterior y posterior en todos los embriones, y rescate parcial del sáculo y la cóclea (n = 6) (Figura 4C). No se espera un rescate completo del fenotipo nulo con la activación constitutiva de Tbx1-GFP porque la regulación temporal de Tbx1 es necesario para el desarrollo normal del oído interno.

Activación de Tbx1-GFP en el oído interno usando Tbx1 Cre / + . (A) Inmunofluorescencia con anticuerpos GFP (rojo) y Tbx1 (rojo) en cortes transversales E10.5 a través de la vesícula ótica (OV). El octavo ganglio craneal, también conocido como ganglio cocleovestibular (CVG), es adyacente al OV. Tubo neural (NT). (B) Activación de Tbx1-GFP por Tbx1 Cre / + no produce defectos morfológicos importantes del oído interno, como se visualiza mediante el relleno de pintura en E14.5. (C) El relleno de pintura muestra insuficiencia de la morfogénesis del oído interno en Tbx1 Cre / - ratones nulos en E14.5 en comparación con el Tbx1-GFP flox / + control. Activación de un solo alelo de Tbx1-GFP en un Tbx1 Cre / - El fondo nulo es capaz de rescatar parcialmente la morfogénesis.

los Tbx1 Cre / + alelo también se utilizó para activar Tbx1-GFP en otros sitios endógenos de expresión de Tbx1 como el mesodermo faríngeo, incluido el campo cardíaco secundario (Figura 5A). Análisis histológico de Tbx1 Cre / + Tbx1GFP flox / + los embriones en E14.5 mostraron un desarrollo cardíaco normal (Figura 5B). El genotipado de ratones en P10 confirmó la presencia de Tbx1 Cre / + Tbx1GFP flox / + ratones en proporciones mendelianas normales (Figura 5B). Por el contrario, los ratones que tienen ambos Tbx1-GFP alelos activados por Tbx1 Cre/ + no son viables (Figura 5B), lo que nos lleva a evaluar el fenotipo cardíaco en Tbx1 Cre / + Tbx1GFP flox / flox embriones en E14.5. Tbx1 Cre / + Tbx1GFP flox / flox los embriones presentaban defectos como tronco arterioso persistente (PTA, 2/5 embriones) y ventrículo derecho de doble salida (DORV, 3/5 embriones), todos con defectos del tabique ventricular (VSD, 5/5 embriones) (Figura 5C). Sobreexpresión de TBX1 se ha asociado previamente con VSD en

10% de ratones transgénicos BAC316.23 [2]. Las malformaciones cardíacas pueden explicar la letalidad perinatal de Tbx1 Cre / + Tbx1GFP flox / flox ratones. Queríamos comparar los niveles de expresión de proteínas de la proteína de fusión Tbx1-GFP activada en el dominio Tbx1 en comparación con la proteína Tbx1 endógena. Para hacer esto, realizamos una transferencia de Western en muestras de tejido (Figura 5D) y observamos que el nivel de proteína Tbx1-GFP expresada a partir de un solo alelo era mayor que el observado para Tbx1 de tipo salvaje endógeno. Sin embargo, esto puede reflejar el mayor dominio de expresión de Tbx1-GFP dentro del linaje celular que está marcado por Tbx1 Cre / + .

Efectos de la dosis de Tbx1-GFP activación sobre el desarrollo del corazón. (A) La inmunofluorescencia con un anticuerpo GFP muestra la activación de Tbx1-GFP por Tbx1 Cre / + en E9.5. La GFP se detecta en la vesícula ótica posterior (VO), los arcos branquiales 1º y 2º (BA1, BA2) y el mesodermo, incluido el campo cardíaco secundario proximal al tracto de salida (OFT). (B) Las secciones transversales histológicas en E14.5 muestran que Tbx1 Cre / + Tbx1-GFP flox / + los mutantes no tienen defectos del tracto de salida o ventriculares. Sobreviven en proporciones mendelianas normales, a diferencia de Tbx1 Cre / + Tbx1-GFP flox / flox mutantes que no son viables. (C) Activación de ambos alelos de Tbx1-GFP por Tbx1 Cre / + causa tabicación del tracto de salida (arteriosis persistente del tronco, PTA) y defectos de alineación (ventrículo derecho de doble salida, DORV) con comunicación interventricular (CIV). (D) Western blot de proteínas aisladas de regiones faríngeas E9.5 para comparar los niveles de expresión de proteínas de Tbx1-GFP y Tbx1 endógena. Para cada genotipo, reunimos 4 embriones (estadio de 23-24 somitas) y cargamos cantidades iguales de proteína por carril. Se probó la misma membrana con anticuerpos contra Tbx1 y β-actina. El tamaño esperado de Tbx1 endógeno es ~ 50 kD mientras que la proteína de fusión Tbx1-GFP es ~ 75 kD. La β-actina se detecta a ~ 40 kD.

A continuación, queríamos probar si Tbx1-GFP también podría rescatar los defectos cardíacos que ocurren en Tbx1 Cre / - embriones (Figura 6A), todos los cuales tienen PTA y VSD (n = 3) [12]. Análisis de Tbx1 Cre / - Tbx1GFP flox / + los embriones en E14.5 mostraron un rescate completo de los defectos de tabicación del tracto de salida (n = 8), aunque el 50% todavía tenía una desalineación del tracto de salida que resultó en un DORV (Figura 6B). VSD se observó en todos Tbx1 Cre / - Tbx1GFP flox / + embriones. No está claro si estos defectos se deben a no rescatar a los Tbx1 fenotipo nulo, o si se deben a la sobreexpresión de Tbx1-GFP proteína (Figura 5D), a pesar de que los niveles de expresión de proteínas detectados por Western Blot no proporcionan información sobre los niveles de actividad funcional de la proteína Tbx1-GFP. También es posible que el fracaso del rescate completo se deba al hecho de que Tbx1-GFP se expresa constitutivamente bajo el control del Rosa26 promotor y, por tanto, no está sujeto a regulación temporal. Activación de ambos Tbx1-GFP alelos en Tbx1 Cre / - Tbx1GFP flox / flox Los embriones resultaron en fenotipos cardíacos más graves, incluido PTA en 5/6 embriones además de VSD (Figura 6C) debido a más Tbx1 desequilibrio de dosis de genes.

Tbx1-GFP puede rescatar parcialmente endógenos Tbx1 Cre / - pérdida de función. Secciones transversales histológicas a través del corazón en E14.5. (A) Tbx1 Cre / - los ratones son funcionalmente nulos y tienen PTA y VSD. Tbx1 Cre / + Tbx1-GFP flox / + los mutantes son viables con histología cardíaca normal. (B) Tbx1 Cre / - Tbx1-GFP flox / + los mutantes exhiben un rescate completo de la tabicación del tracto de salida, aunque la mitad de los embriones tienen ventrículo derecho de doble salida (DORV). (C) Tbx1 Cre / - Tbx1-GFP flox / flox Todos los mutantes tienen defecto del tabique ventricular (VSD), principalmente con tronco arterioso persistente (PTA) y un ejemplo de DORV.


Contenido

La biosíntesis de glutatión implica dos pasos dependientes del trifosfato de adenosina:

  • Primero, gama-la glutamilcisteína se sintetiza a partir de L-glutamato y cisteína. Esta conversión requiere la enzima glutamato-cisteína ligasa (GCL, glutamato cisteína sintasa). Esta reacción es el paso que limita la velocidad en la síntesis de glutatión. [3]
  • En segundo lugar, se agrega glicina al C-terminal de gama-glutamilcisteína. Esta condensación es catalizada por la glutatión sintetasa.

Si bien todas las células animales son capaces de sintetizar glutatión, se ha demostrado que la síntesis de glutatión en el hígado es esencial. Los ratones knockout para GCLC mueren dentro de un mes de nacimiento debido a la ausencia de síntesis hepática de GSH. [4] [5]

El inusual enlace gamma amida en el glutatión lo protege de la hidrólisis por peptidasas. [6]

Ocurrencia Editar

El glutatión es el tiol más abundante en las células animales, oscilando entre 0,5 y 10 mM. Está presente tanto en el citosol como en los orgánulos. [6]

Los seres humanos sintetizan glutatión, pero algunos eucariotas no, incluidas las Fabaceae, Entamoeba, y Giardia. Las únicas arqueas que producen glutatión son las halobacterias. Algunas bacterias, como las cianobacterias y las proteobacterias, pueden biosintetizar el glutatión. [7] [8]

El glutatión existe en estados reducido (GSH) y oxidado (GSSG). La proporción de glutatión reducido a glutatión oxidado dentro de las células es una medida del estrés oxidativo celular [9] [10] donde el aumento de la proporción de GSSG a GSH es indicativo de un mayor estrés oxidativo. En células y tejidos sanos, más del 90% de la reserva total de glutatión se encuentra en forma reducida (GSH) y el resto en forma de disulfuro (GSSG). [11]

En el estado reducido, el grupo tiol del residuo cisteinilo es una fuente de un equivalente reductor. De este modo se genera disulfuro de glutatión (GSSG). El estado oxidado se convierte en el estado reducido por NADPH. [12] Esta conversión es catalizada por la glutatión reductasa:

NADPH + GSSG + H2O → 2 GSH + NADP + + OH -

Antioxidante Editar

GSH protege las células neutralizando (es decir, reduciendo) las especies reactivas de oxígeno. [13] [6] Esta conversión se ilustra mediante la reducción de peróxidos:

2 GSH + R2O2 → GSSG + 2 ROH (R = H, alquilo)

Regulación Editar

Además de desactivar radicales y oxidantes reactivos, el glutatión participa en la protección del tiol y en la regulación redox de las proteínas tiol celulares bajo estrés oxidativo mediante la proteína S-glutationilación, una modificación del tiol postraduccional regulada por redox. La reacción general implica la formación de un disulfuro asimétrico a partir de la proteína protectable (RSH) y GSH: [14]

El glutatión también se emplea para la desintoxicación de metilglioxal y formaldehído, metabolitos tóxicos producidos bajo estrés oxidativo. Esta reacción de desintoxicación se lleva a cabo mediante el sistema glioxalasa. La glioxalasa I (EC 4.4.1.5) cataliza la conversión de metilglioxal y glutatión reducido en S-D-lactoil-glutatión. La glioxalasa II (EC 3.1.2.6) cataliza la hidrólisis de S-D-lactoil-glutatión a glutatión y D-ácido láctico.

Mantiene los antioxidantes exógenos como las vitaminas C y E en su estado reducido (activo). [15] [16] [17]

Metabolismo Editar

Entre los muchos procesos metabólicos en los que participa, el glutatión es necesario para la biosíntesis de leucotrienos y prostaglandinas. Desempeña un papel en el almacenamiento de cisteína. El glutatión mejora la función de la citrulina como parte del ciclo del óxido nítrico. [18] Es un cofactor y actúa sobre la glutatión peroxidasa. [19]

Conjugación Editar

El glutatión facilita el metabolismo de los xenobióticos. Las enzimas glutatión S-transferasa catalizan su conjugación con xenobióticos lipofílicos, facilitando su excreción o su metabolismo adicional. [20] El proceso de conjugación se ilustra mediante el metabolismo de norte-acetilo-pag-benzoquinona imina (NAPQI). NAPQI es un metabolito reactivo formado por la acción del citocromo P450 sobre el paracetamol (acetaminofén). El glutatión se conjuga con NAPQI y el conjunto resultante se excreta.

Posibles neurotransmisores Editar

El glutatión, junto con el glutatión oxidado (GSSG) y el S-nitrosoglutatión (GSNO), se unen al sitio de reconocimiento del glutamato de los receptores NMDA y AMPA (a través de sus restos γ-glutamilo). GSH y GSSG pueden ser neuromoduladores. [21] [22] [23] En concentraciones milimolares, GSH y GSSG también pueden modular el estado redox del complejo del receptor NMDA. [22] El glutatión se une y activa los receptores ionotrópicos, lo que potencialmente lo convierte en un neurotransmisor. [24]

GSH activa el receptor P2X7 purinérgico de la glía de Müller, induciendo señales transitorias de calcio agudas y liberación de GABA tanto de las neuronas retinianas como de las células gliales. [25] [26]

En plantas Editar

En las plantas, el glutatión está involucrado en el manejo del estrés. Es un componente del ciclo glutatión-ascorbato, un sistema que reduce el venenoso peróxido de hidrógeno. [27] Es el precursor de las fitoquelatinas, oligómeros de glutatión que quelan metales pesados ​​como el cadmio. [28] El glutatión es necesario para una defensa eficaz contra patógenos vegetales como Pseudomonas syringae y Phytophthora brassicae. [29] La adenilil-sulfato reductasa, una enzima de la vía de asimilación de azufre, utiliza glutatión como donante de electrones. Otras enzimas que utilizan glutatión como sustrato son las glutaredoxinas. Estas pequeñas oxidorreductasas están involucradas en el desarrollo de las flores, el ácido salicílico y la señalización de las defensas de las plantas. [30]

La biodisponibilidad sistémica del glutatión consumido por vía oral es escasa porque el tripéptido es el sustrato de las proteasas (peptidasas) del tubo digestivo y debido a la ausencia de una sustancia específica. transportador de glutatión a nivel de la membrana celular. [31] [32] En otro estudio, los investigadores informaron que la suplementación con glutatión a largo plazo ofrece protección contra el daño oxidativo. En este estudio, la suplementación con 500 mg de GSH oral no solo aumentó el GSH eritrocítico, sino que también disminuyó significativamente la 8-OHdG en tres meses en personas diabéticas de edad avanzada (edad superior a 55 años) [33].

Debido a que la suplementación directa de glutatión no tiene éxito, el suministro de las materias primas nutricionales utilizadas para generar GSH, como la cisteína y la glicina, puede ser más eficaz para aumentar los niveles de glutatión. Otros antioxidantes como el ácido ascórbico (vitamina C) también pueden funcionar sinérgicamente con el glutatión, evitando el agotamiento de cualquiera de ellos. El ciclo glutatión-ascorbato, que actúa para desintoxicar el peróxido de hidrógeno (H2O2), es un ejemplo muy específico de este fenómeno.

Se ha demostrado que la suplementación oral con gamma-glutamilcisteína aumenta eficazmente los niveles de glutatión celular. [34]

Además, compuestos como la N-acetilcisteína [35] (NAC) y el ácido alfa lipoico [36] (ALA, que no debe confundirse con el ácido alfa linolénico no relacionado) son capaces de ayudar a regenerar los niveles de glutatión. La NAC en particular se usa comúnmente para tratar la sobredosis de acetaminofén, un tipo de envenenamiento potencialmente fatal que es dañino en parte debido al agotamiento severo de los niveles de glutatión. Es un precursor de la cisteína.

Calcitriol (1,25-dihidroxivitamina D)3), el metabolito activo de la vitamina D3, después de ser sintetizado a partir del calcifediol en el riñón, aumenta los niveles de glutatión en el cerebro y parece ser un catalizador para la producción de glutatión. [37] Se necesitan unos diez días para que el cuerpo procese la vitamina D3 en calcitriol. [38]

STambién se ha demostrado que la -adenosilmetionina (SAMe), un cosustrato involucrado en la transferencia de grupos metilo, aumenta el contenido de glutatión celular en personas que padecen una deficiencia de glutatión relacionada con una enfermedad. [39] [40] [41]

El glutatión bajo se observa comúnmente en la emaciación y el balance de nitrógeno negativo, como se observa en el cáncer, el VIH / SIDA, la sepsis, los traumatismos, las quemaduras y el sobreentrenamiento atlético. También se observan niveles bajos en períodos de inanición. Se supone que estos efectos están influenciados por la mayor actividad glucolítica asociada con la caquexia, que resulta de niveles reducidos de fosforilación oxidativa. [42] [43]

Reactivo de Ellman y monobromobimane Editar

El glutatión reducido se puede visualizar usando el reactivo de Ellman o derivados de bimane como el monobromobimane. El método del monobromobimane es más sensible. En este procedimiento, las células se lisan y los tioles se extraen usando un tampón de HCl. A continuación, los tioles se reducen con ditiotreitol y se marcan con monobromobimane. El monobromobimane se vuelve fluorescente después de unirse a GSH. A continuación, los tioles se separan mediante HPLC y se cuantifica la fluorescencia con un detector de fluorescencia.

Monoclorobimane Editar

Utilizando monoclorobimane, la cuantificación se realiza mediante microscopía de barrido láser confocal después de la aplicación del tinte a las células vivas. [44] Este proceso de cuantificación se basa en medir las tasas de cambios de fluorescencia y se limita a las células vegetales.

CMFDA también se ha utilizado por error como sonda de glutatión. A diferencia del monoclorobimano, cuya fluorescencia aumenta al reaccionar con el glutatión, el aumento de la fluorescencia de CMFDA se debe a la hidrólisis de los grupos acetato dentro de las células. Aunque CMFDA puede reaccionar con el glutatión en las células, el aumento de fluorescencia no refleja la reacción. Por lo tanto, los estudios que utilizan CMFDA como sonda de glutatión deben revisarse y reinterpretarse. [45] [46]

ThiolQuant Green Editar

La principal limitación de estas sondas basadas en bimane y muchas otras sondas informadas es que estas sondas se basan en reacciones químicas irreversibles con glutatión, lo que hace que estas sondas sean incapaces de monitorizar la dinámica del glutatión en tiempo real. Recientemente, se informó sobre la primera sonda fluorescente basada en reacción reversible, ThiolQuant Green (TQG), para glutatión. [47] ThiolQuant Green no solo puede realizar mediciones de alta resolución de los niveles de glutatión en células individuales utilizando un microscopio confocal, sino que también se puede aplicar en citometría de flujo para realizar mediciones de volumen.

RealThiol Editar

La sonda RealThiol (RT) es una sonda GSH basada en reacción reversible de segunda generación. Algunas características clave de RealThiol: 1) tiene una cinética de reacción hacia adelante y hacia atrás mucho más rápida en comparación con ThiolQuant Green, que permite el monitoreo en tiempo real de la dinámica de GSH en células vivas 2) solo se necesita RealThiol micromolar a submicromolar para teñir en experimentos basados ​​en células, que inducen una perturbación mínima del nivel de GSH en las células 3) se implementó un fluoróforo cumarínico de alto rendimiento cuántico para minimizar el ruido de fondo y 4) se ha ajustado la constante de equilibrio de la reacción entre RealThiol y GSH para responder a la concentración fisiológicamente relevante de GSH. [48] ​​RealThiol se puede utilizar para realizar mediciones de los niveles de glutatión en células individuales utilizando un microscopio confocal de alta resolución, así como también se puede aplicar en citometría de flujo para realizar mediciones a granel de una manera de alto rendimiento.

También se ha desarrollado una sonda de RT dirigida a orgánulos. Se informó y demostró una versión dirigida a las mitocondrias, MitoRT, en el seguimiento de la dinámica del glutatión mitocondrial tanto en el microscopio confocoal como en el análisis basado en FACS. [49]

Sondas de glutatión a base de proteínas Editar

Otro enfoque, que permite la medición del potencial redox del glutatión a una alta resolución espacial y temporal en células vivas, se basa en imágenes redox utilizando la proteína verde fluorescente sensible a redox (roGFP) [50] o la proteína fluorescente amarilla sensible a redox (rxYFP). ). [51] Debido a su concentración fisiológica muy baja, GSSG es difícil de medir con precisión. La concentración de GSSG varía de 10 a 50 μM en todos los tejidos sólidos y de 2 a 5 μM en sangre (13 a 33 nmol por gramo de Hb). La proporción de GSH a GSSG de extractos de células enteras se estima entre 100 y 700. [52] Esas proporciones representan una mezcla de los grupos de glutatión de diferentes estados redox de diferentes compartimentos subcelulares (por ejemplo, más oxidado en el RE, más reducido en el mitocondrial matriz), sin embargo. Las proporciones de GSH a GSSG in vivo se pueden medir con precisión subcelular utilizando sensores redox basados ​​en proteínas fluorescentes, que han revelado proporciones de 50.000 a 500.000 en el citosol, lo que implica que la concentración de GSSG se mantiene en el rango pM. [53]

Se han publicado regularmente revisiones exhaustivas sobre la importancia del glutatión en las enfermedades humanas en revistas médicas revisadas por pares. [54] [55] [56] [57] [58] [59] [60] [61] [62] [63] Vínculos indiscutibles de causa y efecto entre el metabolismo del GSH y enfermedades, como diabetes, fibrosis quística, cáncer, Se han demostrado enfermedades neurodegenerativas, VIH y envejecimiento. Se han propuesto diversas explicaciones de por qué el agotamiento de GSH está relacionado con el estrés oxidativo en estos estados patológicos.

Cáncer Editar

Una vez que se ha establecido un tumor, los niveles elevados de glutatión pueden actuar para proteger las células cancerosas al conferir resistencia a los fármacos quimioterapéuticos. [64] El fármaco antineoplásico de mostaza canfosfamida se modeló a partir de la estructura del glutatión.

Fibrosis quística Editar

Se han completado varios estudios sobre la eficacia de la introducción de glutatión inhalado en personas con fibrosis quística con resultados mixtos. [65] [66]

Enfermedad de Alzheimer Editar

Si bien las placas extracelulares de beta amiloide (Aβ), los ovillos neurofibrilares (NFT), la inflamación en forma de astrocitos y microglia reactivos y la pérdida neuronal son características patológicas constantes de la enfermedad de Alzheimer (EA), aún no se ha establecido un vínculo mecanicista entre estos factores. ser aclarado. Aunque la mayor parte de la investigación anterior se ha centrado en Aβ fibrilar, ahora se considera que las especies de Aβ oligoméricas solubles son de gran importancia patológica en la EA. La regulación al alza de GSH puede proteger contra los efectos oxidativos y neurotóxicos del Aβ oligomérico. [ cita médica necesaria ]

El agotamiento de la forma cerrada de GSH en el hipocampo puede ser un biomarcador de diagnóstico temprano potencial para la EA. [67] [68]

Enología Editar

El contenido de glutatión en el mosto, la primera forma cruda de vino, determina el efecto de pardeamiento o caramelización durante la producción de vino blanco al atrapar las quinonas del ácido cafeoiltartárico generadas por oxidación enzimática como producto de reacción de la uva. [69] Su concentración en el vino puede determinarse mediante espectrometría de masas UPLC-MRM. [70]

Cosméticos Editar

El glutatión es el agente más común que se toma por vía oral en un intento de blanquear la piel. [71] También se puede utilizar como crema. [71] No está claro si realmente funciona o no a partir de 2019. [72] Debido a los efectos secundarios que pueden resultar del uso intravenoso, el gobierno de Filipinas recomienda no hacerlo. [73]


Parte 2: Neuropatología de la esclerosis múltiple

00: 00: 12.17 Hola a todos, bienvenidos a mi presentación de iBiology.
00: 00: 16.14 Esta es la parte 2 de una serie sobre esclerosis múltiple y remielinización.
00: 00: 20.26 La presentación de la parte 1 está a cargo del profesor Mikael Simons de
00: 00: 26.23 la Universidad Técnica de Munich. Soy Christine Stadelmann del
00: 00: 31.13 Instituto de Neuropatología en Gottingen, y ahora estoy en el siguiente
00: 00: 35.04 presentación que va a hablar sobre la patología de la esclerosis múltiple y
00: 00: 39.11 también todas las perspectivas que vemos para la remielinización.
00: 00: 43.06 La EM es una enfermedad que afecta aproximadamente a 2,5 millones de personas
00: 00: 52.10 en todo el mundo. Es una enfermedad que normalmente comienza en la edad adulta.
00: 00: 57.16 Y esa es una patogénesis bastante compleja. Ahora se cree
00: 01: 03.01 que existe una predisposición genética para la enfermedad, pero que
00: 01: 06.16 se complementa con factores ambientales. Estos factores
00: 01: 11.02 juntos conducen a una respuesta inmunitaria aberrante o destructiva
00: 01: 14.19 que se dirige al sistema nervioso central. Con respecto a la
00: 01: 19.02 predisposición genética, ahora sabemos que los polimorfismos en
00: 01: 21.28 genes reguladores inmunes son relevantes para la predisposición
00: 01: 25.24 para contraer la enfermedad. Por otro lado, los factores ambientales
00: 01: 29.25 como el VEB, la vitamina D y el tabaquismo afectan el riesgo de atraer
00: 01: 37.28 - o contraer la enfermedad. Con respecto al curso de la enfermedad, la EM
00: 01: 44.05 es bastante especial. En eso básicamente cambia su rostro. Al principio,
00: 01: 50.29 La EM normalmente se presenta como una enfermedad remitente recurrente con casi
00: 01: 55.19 recuperación completa entre las recaídas. Sin embargo, después de varios años
00: 02: 00.26 de la enfermedad, muchos pacientes, alrededor del 70%, se convierten en una secundaria progresiva
00: 02: 07.10 fase de la enfermedad en la que básicamente se produce esta acumulación de capacidad
00: 02: 12.02 sin recaídas superpuestas. Entonces, básicamente, sin aparentemente
00: 02: 16.28 activación inmunitaria periférica. Por el contrario, el volumen cerebral cambia
00: 02: 24.12 ocurren básicamente desde el principio. Y eso es con reducción
00: 02: 28.29 en el cerebro, y la disminución puede ser un problema real con respecto a la
00: 02: 34.08 desarrollo de la fase secundaria progresiva de la enfermedad.
00: 02: 37.01 ¿Qué pasa con la patología de la esclerosis múltiple? Aquí lo que ves
00: 02: 42.08 es una sección fija del cerebro con el periventricular muy prominente
00: 02: 48.12 lesiones cerebrales que ves aquí. Y estas zonas grisáceas
00: 02: 52.06 son muy prominentes, muy claros, los ves en ambos lados
00: 02: 55.29 aquí. En ambos hemisferios del cerebro. Y estos representan
00: 02: 59.10 lesiones de esclerosis múltiple completamente desmielinizadas. Aparte de esto
00: 03: 04.14 área periventricular, otros sitios de predilección son los nervios ópticos,
00: 03: 08.17 el área cortical subpial a la que llegaré un poco más tarde, la columna
00: 03: 13.02 cordón, el tronco encefálico y también el cerebelo.
00: 03: 16.19 ¿Cuáles son ahora las características clave de la patología de la EM?
00: 03: 20.10 Por un lado, claramente las lesiones focales desmielinizadas
00: 03: 24.07 que discutiremos en profundidad en el próximo minuto, pero también el
00: 03: 29.29 la patología cerebral difusa parece ser cada vez más importante.
00: 03: 34.08 Especialmente con una mayor duración de la enfermedad. Y esto incluye
00: 03: 39.13 Infiltración de linfocitos T meníngeos y parenquimatosos, difusa
00: 03: 42.10 activación de la microglía, daño y pérdida neuroaxonal, y también
00: 03: 47.02 luego la atrofia cerebral que es probablemente la causa de todo eso.
00: 03: 52.26 Entonces, en esta presentación, me enfocaré principalmente en la lesión focal
00: 03: 59.08 patología que se observa en la EM. Esta es una crónica típica
00: 04: 05.20 lesión desmielinizada, ves la mielina en azul, ves la
00: 04: 10.13 lesión desmielinizada en rosa, también ves que esta lesión es
00: 04: 15.17 periventricular localizado, tan característico para un establecido
00: 04: 19.04 Lesión de EM. Ve un borde de lesión muy afilado. Ves basicamente
00: 04: 24.16 que la lesión es hipocelular en el centro de la lesión, y no
00: 04: 28.24 ver acumulación de células en el borde de la lesión. Así que esto
00: 04: 34.08 aparentemente es más o menos una cicatriz con muy poca o ninguna
00: 04: 39.10 actividad de la enfermedad en curso. Muy diferente de lo que te he mostrado antes,
00: 04: 46.06 es esta lesión crónica activa o llamada "latente". Ahí solo
00: 04: 50.13 a simple vista en esta diapositiva de aquí, puede ver que hay un
00: 04: 55.20 Excentración de células aquí en el borde de la lesión alrededor de este
00: 04: 59.28 área de la lesión aquí. Y si haces algo de inmunohistoquímica,
00: 05: 04.18 y mire la diapositiva con más detalle, verá que hay
00: 05: 07.13 acumulación básicamente de células mieloides. De macrófagos y
00: 05: 11.00 microglía activada. Y lo que también es muy importante, nuclear
00: 05: 14.17 en el centro de lesiones, prácticamente no hay activación de microglia. También no
00: 05: 18.23 se encuentra el reclutamiento de fagocitos. Esta activación de microglia, fagocito
00: 05: 26.06 reclutamiento, activación de células mieloides, está muy acompañado por
00: 05: 30.20 Daño axonal agudo. Y la imagen que ves aquí es correcta
00: 05: 35.10 de este borde de la lesión. Así que desde este borde de lesión humeante,
00: 05: 40.22 aparentemente con alguna actividad desmielinizada residual.
00: 05: 45.02 Y lo que realmente miras en esta aplicación de inmunohistoquímica
00: 05: 48.10 es una alteración del transporte axonal, por lo que observa el acumulado
00: 05: 53.18 APP aquí en los axones. Y lo que sabemos de los estudios con animales
00: 05: 57.06 y estudios en trauma cerebral, que esta proteína APP permanece allí durante
00: 06: 02.29 alrededor de tres semanas. Básicamente, esto significa que estos axones
00: 06: 07.13 han sido dañados o desmielinizados en las últimas tres semanas.
00: 06: 10.24 O significa que tienen un deterioro funcional persistente.
00: 06: 15.17 Y todo esto, por supuesto, es realmente relevante para nuestra comprensión de
00: 06: 19.00 enfermedad progresiva. Y esta es solo una ilustración esquemática
00: 06: 24.05 de esta actividad de lesión latente. Básicamente, eso es un sello
00: 06: 29.07 realmente de la esclerosis múltiple y es el tipo de lesión más común
00: 06: 33.02 observado en pacientes con enfermedad progresiva. Qué pasa con la
00: 06: 38.23 ¿lesión muy temprana? Quiero decir que rara vez se tiene la oportunidad
00: 06: 42.11 incluso para ver las lesiones tempranas debido a que una EM típica regular
00: 06: 46.11 El paciente no se somete a una biopsia cerebral, por supuesto. Vos tambien
00: 06: 50.02 realmente veo eso solo bajo ciertas circunstancias, especialmente cuando
00: 06: 54.02 la presentación clínica o la presentación de resonancia magnética no fue
00: 06: 58.01 completamente claro. Lo que ves aquí es la misma tinción que antes,
00: 07: 04.08 con histoquímica PAS, y nuevamente la mielina en azul. Y de nuevo el
00: 07: 07.19 la lesión es rosa. Ves una hipercelularidad ahí, ves todo esto
00: 07: 13.28 la hipercelularidad incluso aumenta en el borde de la lesión. Y si tu
00: 07: 19.00 haz algo de inmunohistoquímica y miras el macrófago
00: 07: 21.28 y toda la microglía activada, nuevamente se ve claramente acentuada
00: 07: 26.18 borde de la lesión aquí. Nuevamente, hablando de la evolución de la lesión centrífuga
00: 07: 34.18 básicamente. Pero, por supuesto, aquí en esta lesión bastante temprana, ves
00: 07: 40.11 también que la lesión está llena de macrófagos en el centro de la lesión.
00: 07: 43.18 Con respecto a los astrocitos, es posible que vea astrocitos iniciales
00: 07: 51.04 reacción, astrogliosis reactiva en la propia lesión, así como en el
00: 07: 55.08 borde de la lesión. Y esto es bastante importante con respecto al animal.
00: 07: 59.18 lesión modelo que les mostraré en un minuto. Con saludos
00: 08: 02.28 a la infiltración de células T, esto puede ser muy escaso en esta lesión temprana
00: 08: 08.22 que te acabo de mostrar. Si miras aquí, esto es positivo para CD8
00: 08: 13.23 celdas que estamos viendo aquí. Si observa los CD3, es posible que tenga
00: 08: 17.04 aproximadamente el doble del número que muestro aquí. Muy escaso.
00: 08: 21.11 Pero mejorando un poco con la evolución de la lesión. Con respecto a
00: 08: 27.12 nuestro objetivo final en una remielinización de la lesión, por supuesto la evaluación de
00: 08: 31.23 oligodendrocitos maduros, precursores de oligodendrocitos, es muy relevante
00: 08: 35.26 en las lesiones. Y esto es, por ejemplo, aquí, una inmunohistoquímica de tinción
00: 08: 39.25 para NogoA, para oligodendrocitos maduros. Y como parece, la madura
00: 08: 45.24 los oligodendrocitos no parecen estar muy afectados aquí por este
00: 08: 51.25 formación de lesiones. Ves una pequeña reducción aquí en el activo
00: 08: 55.19 borde de la lesión, pero no mucho. Incluso parece que la proteína
00: 08: 59.16 está regulada al alza en la lesión, en comparación con la sustancia blanca clara.
00: 09: 04.04 Lo que nos gusta mucho hacer en nuestra investigación, pero también en el ámbito clínico
00: 09: 11.02 práctica, es poner en escena nuestras lesiones desmielinizadas con respecto a
00: 09: 15.26 a la actividad desmielinizada. Poder comparar lesiones entre pacientes.
00: 09: 21.02 y también lesiones entre diferentes enfermedades. Para comparar básicamente
00: 09: 25.24 etapas iguales de formación de lesiones. Que utilizamos para los fines
00: 09: 29.29 por un lado, la presencia de productos de degradación de la mielina en
00: 09: 33.00 macrófagos. Usamos proteínas de mielina mayor y menor y con la
00: 09: 37.06 concepto de que las principales proteínas de mielina necesitan más tiempo para ser
00: 09: 40.24 digerido. Entonces, si encuentra proteínas de mielina aún menores, como MOG,
00: 09: 44.29 cAMP, MAG, en los macrófagos. Esto básicamente indica
00: 09: 48.01 una lesión más reciente. Lo que también resulta muy, muy útil
00: 09: 52.25 son algunos marcadores de activación de macrófagos, como MRP14.
00: 09: 57.08 Eso realmente resalta los monocitos recientemente invadidos de la sangre
00: 10: 02.20 corriente. Por tanto, es un marcador muy útil que se utiliza para determinar la edad de las lesiones.
00: 10: 07.04 en nuestro entorno. ¿Cuándo ocurren qué lesiones? Cuándo están ellos
00: 10: 14.13 más prominente? Y ahí creo que lo que es muy importante para ti es
00: 10: 19.24 que, por un lado, las lesiones verdes que se muestran aquí,
00: 10: 22.07 estas son las lesiones activamente desmielinizantes. Ocurren en
00: 10: 25.29 enfermedad monofásica, ocurren en la enfermedad remitente recurrente,
00: 10: 29.23 también ocurren un poco en las formas de enfermedades más crónicas, como
00: 10: 35.10 como una EM progresiva secundaria y progresiva primaria.
00: 10: 38.02 Pero en estas últimas etapas de la lesión, es realmente la crónica
00: 10: 42.22 humeantes o las lesiones crónicas activas que predominan
00: 10: 45.25 también, por supuesto, las inactivas, las llamadas lesiones quemadas. Y
00: 10: 49.19 también en parte, las placas de sombra. Y las placas de sombra son
00: 10: 52.12 aquí realmente indicado en rosa. Así que solo para comparar, mi plan aquí es
00: 11: 03.26 para mostrarte también un poco al menos de la patología de las lesiones NMO.
00: 11: 08.05 Para tener una comparación con la EM y observar la mielina
00: 11: 12.13 patología que puede ser diferente en este entorno clínico. Entonces estos
00: 11: 18.13 son en realidad secciones de la médula espinal de un paciente con neuromielitis óptica.
00: 11: 23.04 Y con solo mirar aquí el LFB / PAS y también el macrófago
00:11: 27.13 inmunohistoquímica, ves una gran lesión en el dorso
00: 11: 31.19 funiculus y también del área de la médula espinal ventrolateral aquí.
00: 11: 36.07 Y con solo mirar la tinción de macrófagos, podrías
00:11: 40.06 decir que por la densidad que ves, que el ventrolateral
00:11: 44.02 La lesión es mucho más joven, mucho más reciente. En tono rimbombante,
00: 11: 49.07 en 2004, Vanda Lennon ha demostrado que NMO,
00: 11: 53.25 neuromielitis óptica, no es una enfermedad de espectro como la esclerosis múltiple
00: 11: 58.26 o una variante de la esclerosis múltiple, pero en realidad una enfermedad completamente diferente
00: 12: 04.01 entidad. Y que demostró que los anticuerpos anti-AQP4
00: 12: 08.10 son realmente una clara firma sérica de la enfermedad. Neuromielitis
00: 12: 13.28 óptica es básicamente una enfermedad caracterizada por la médula espinal y óptica
00:12: 17.25 Compromiso de los nervios. Y, por supuesto, no todos los pacientes con estos
00: 12: 20.29 signos y síntomas clínicos tienen anticuerpos anti-AQP4.
00: 12: 24.22 Pero aquellos que tienen, se designan entonces autoinmunidad anti-AQP4
00: 12: 31.18 y si realiza un ensayo de inmunofluorescencia indirecta en
00:12: 35.19 estos pacientes. Por ejemplo, en su sección cerebelosa,
00:12: 39.24 Mira exactamente lo que te muestro aquí de este lado. Es decir, lo harías
00: 12: 43.25 ver una delineación clara, muy bonita y fina de la superficie del pial
00: 12: 49.28 por un lado, y de los capilares, como se ve aquí a la derecha
00: 12: 55.24 sección del cerebro. Indicando que con los anticuerpos anti-APQ4, básicamente
00: 13: 01.14 etiquetar los astrocitos procesadores de alimentos que se encuentran en los capilares cerebrales.
00: 13: 07.28 Ahora, sabiendo que básicamente una respuesta inmune anti-astrocitos es
00: 13: 19.11 causante de NMO y observando la morfología de la lesión que ves
00: 13: 26.07 en el cerebro, probablemente esperarías un
00: 13: 30.08 tipo de patología. Sin embargo, mirando la lesión aquí en el LFB
00: 13: 34.06 histoquímica PAS, realmente podrías equivocarte en el diagnóstico
00: 13: 39.06 y diagnosticar una lesión de EM. Si no miras con suficiente atención.
00: 13: 43.18 Sin embargo, yendo un poco más profundo y mirando los astrocitos, por ejemplo,
00: 13: 48.01 usando inmunohistoquímica GFAP. Ves que los astrocitos no son
00:13: 51.28 usualmente destruido en el centro de la lesión, hacia la parte inferior derecha.
00: 13: 56.07 Se conservan en el borde superior izquierdo aquí, donde el
00: 14: 02.18 se sitúa la sustancia blanca de la placa peri. Yendo entonces más lejos y realmente
00: 14: 08.02 tinción para AQP4 en sí, verá que esta inmunorreactividad es uniforme
00: 14: 12.07 disminuyó aún más, en comparación con la proteína de estructura GFAP.
00:14: 16.23 Nuevamente, como evidencia de que los anticuerpos AQP4 aquí juegan un papel en la
00: 14: 23.20 enfermedad. Si luego observa oligodendrocitos o maduros y
00: 14: 28.12 células precursoras de oligodendrocitos en las lesiones usando NogoA y
00: 14: 33.00 Olig2 como marcadores, como lo hicimos aquí. Ves que los oligodendrocitos
00: 14: 36.20 están en gran parte ausentes de estas lesiones agudas, completamente destruidas
00: 14: 41.22 debido al proceso temprano de formación de lesiones en anti-APQ4 positivo
00:14: 46.24 Trastorno del espectro de neuromielitis óptica. Mirando luego a la mielina
00:14: 53.23 patología de las proteínas un poco más de cerca, ves que la mielina principal
00: 15: 00.02 proteínas, como MBP y también PAP, se conservan en gran medida
00: 15: 04.11 en estas primeras lesiones. Y no te diagnosticarían fácilmente
00: 15: 08.29 por desmielinización aquí. Mientras que si miras MAG o CMP,
00: 15: 14.08 encontrará una disminución o pérdida total de estas proteínas de mielina en la lesión.
00: 15: 19.16 Muy indicativo aquí de un proceso desmielinizado patológico distinto
00: 15: 27.22 pasando. Y lo que se podría concluir de eso, que hay al menos
00: 15: 32.17 dos mecanismos principales de desmielinización. Por un lado,
00: 15: 36.00 un mecanismo por el cual el oligodendrocito sufre de una
00: 15: 40.20 daño por muerte de células oligodendrogliales. Y la vaina de mielina entonces
00: 15: 44.22 degenera secundariamente. Y por otro lado, enfermedad
00: 15: 49.04 escenarios de circunstancias patológicas, ya sean primarias
00: 15: 52.23 el objetivo de la respuesta inmune es la vaina de mielina. Y
00: 15: 57.20 cualquiera de los dos es eliminado por los macrófagos concomitantemente con el
00: 16: 02.14 oligodendrocito. O incluso los oligodendrocitos aparecen conservados
00: 16: 07.02 hasta cierto punto. En la siguiente parte, me gustaría mucho
00: 16: 12.20 para volver un poco a lo que Mika ya ha discutido,
00: 16: 18.10 es decir, progresión de la enfermedad en la esclerosis múltiple.
00: 16: 21.07 Y ciertamente, este es uno de los rasgos característicos de la
00: 16: 24.20 enfermedad. Y de nuevo, como ya dije, muy especial y hasta ahora,
00: 16: 29.22 también rompecabezas sin resolver. Y desde hace décadas, los neuropatólogos
00: 16: 33.29 han tratado de establecer realmente la correlación de la enfermedad progresiva
00: 16: 38.07 en sus materiales. Lo que es muy importante en los pacientes con EM en etapa tardía es
00:16: 44.22 ciertamente patología cortical. Y allí especialmente, cortical subpial
00:16: 48.18 desmielinización, como se describe aquí con las flechas. Muy característico
00: 16: 54.05 para enfermedades crónicas, muy generalizadas en pacientes crónicos. Y
00: 16: 57.23 por supuesto, como sabrá, no detectado por imágenes de resonancia magnética.
00: 17: 02.17 Entonces, realmente, escapando de nuestras correlaciones patológicas clínicas
00: 17: 07.29 normalmente. Sin embargo, es importante destacar que lo que debe mencionarse es que
00: 17: 13.16 la desmielinización cortical no es solo una característica de la etapa tardía
00: 17: 17.07 enfermedad, pero también ocurre temprano en la enfermedad e incluso puede
00: 17: 21.12 estar presente realmente en el primer ataque de la enfermedad, básicamente.
00: 17: 28.11 Lo que realmente puede contribuir a la importancia en las enfermedades crónicas es
00:17: 35.25 Sin embargo, esa remielinización en curso que es muy eficiente en el
00:17: 40.19 La corteza puede disminuir con la duración de la enfermedad. Y así, deja
00: 17: 46.02 áreas corticales subpiales completamente desmielinizadas que son por supuesto
00: 17: 50.14 entonces es muy fácil de visualizar como se ve aquí en esta imagen.
00:17: 56.17 Esta diapositiva tiene dos propósitos. Así que el esquema de la derecha en
00: 18: 02.17 un lado, te muestra la discrepancia entre la materia blanca
00: 18: 06.23 desmielinización en verde, y aquí principalmente periventricular, como se muestra
00: 18: 11.04 aquí. Y la desmielinización cortical se muestra en naranja aquí, que realmente
00: 18: 17.08 supera en número al volumen de desmielinización de la materia blanca aquí
00: 18: 21.01 de lejos. Por otro lado, lo que también es fácilmente visible en este
00:18:26 La sección frontal del cerebro, y se ve principalmente en el esquema de la mano izquierda aquí, es la
00:18: 31.16 atrofia cerebral importante que se encuentra en una proporción considerable de
00:18: 35.23 Pacientes con EM que también comienza temprano en la enfermedad. Y
00: 18: 40.12 tal vez, incluso una primera señal. Ahí estoy pensando principalmente en
00: 18: 44.19 los datos de resonancia magnética sobre atrofia cortical, como una señal temprana de los pacientes
00:18: 51.04 que realmente se convierten en una enfermedad secundaria progresiva.
00: 18: 54.13 ¿Cuáles son realmente las características subyacentes que contribuyen a esta atrofia?
00: 19: 02.22 del cerebro de la EM? Y principalmente a la atrofia cortical. Y ahí
00: 19: 07.10 durante los últimos años, realmente la noción apareció en neuropatología
00:19: 12.12 que no es realmente ese daño neuropatológico o daño a
00:19: 17.14 neuronas y axones. No solo está relacionado con lesiones focales. Y no
00: 19: 21.24 incluso se correlacionan bien con las lesiones focales, pero más bien es un difuso
00: 19: 25.16 fenómeno. Y hay un trabajo de Doron Merkler que
00: 19: 30.04 contribuye. Donde muestran una pérdida de columna en la esclerosis múltiple.
00:19: 33.17 corteza, independiente de la desmielinización focal. Que podria ahora
00:19: 40.16 ¿La remielinización se suma a nuestra imagen de la esclerosis múltiple?
00:19: 43.28 La remielinización en la EM se ha discutido durante décadas.
00:19: 48.12 Y especialmente prominente fue John Prineas delineando
00: 19: 53.02 la morfología de la remielinización en el cerebro de la EM, como se muestra aquí
00: 19: 57.25 en este artículo de Annuals of Neurology, que mostró muy bien
00: 20: 01.04 los axones con una fina vaina de mielina que indican remielinización
00: 20: 08.07 aquí en esta placa de EM. Al lado izquierdo, lo que realmente ves
00: 20: 12.02 es una placa de sombra completamente remielinizada. Y creo que esto es realmente
00: 20: 15.25 la meta, aquí es donde nos gustaría ir. Esto es lo que nosotros
00: 20: 20.13 quisiera lograr para todas las lesiones, para todos nuestros pacientes.
00: 20: 23.20 Así que hágalos remielinizar por completo después de cierto tiempo.
00: 20: 28.04 ¿Ese objetivo es útil de alguna manera? Y Mikael ya ha
00: 20: 34.28 discutieron que la remielinización parece ser la más
00: 20: 38.25 o es quizás la terapia protectora más axonal que podamos
00: 20: 43.01 tener. Sin embargo, creo que es necesario trabajar más
00: 20: 47.19 para demostrar eso realmente formalmente, especialmente in vivo en el paciente.
00: 20: 51.11 Hicimos un poco de trabajo en esa dirección, y mostrando aquí, por ejemplo,
00: 20: 56.16 que la densidad axonal es mayor en remielinizados en comparación con
00: 21: 00.18 áreas de lesión desmielinizada. Sin embargo, por supuesto, uno tiene que ser
00: 21: 04.26 consciente aquí, qué es la gallina y qué es el huevo.
00: 21: 07.02 También puede ser que la remielinización haya ocurrido mucho más
00: 21: 10.08 fácilmente en áreas de lesión que estaban mucho menos dañadas y
00: 21: 14.22 probablemente en un axonal más alto y probablemente también en un OPC más alto
00: 21: 18.18 densidad aquí. Pero aún así, las áreas remielinizadas en general se ven mucho
00: 21: 23.08 mejor que las áreas desmielinizadas. ¿Qué pasa con la oligodendroglia?
00: 21: 28.22 que ciertamente necesitamos si queremos inducir y estimular
00:21: 32.10 ¿remielinización? ¿Están presentes en lesiones crónicas? Cuándo están ellos
00: 21: 36.20 ¿perdido? Parte de estas preguntas aún están abiertas. Y lo intentamos
00: 21: 41.25 acercarnos a algunos de estos aspectos en un trabajo reciente, donde analizamos
00: 21: 47.24 densidad oligodendroglial en lesiones desmielinizadas corticales. Y donde nosotros
00:21: 51.25 vi que realmente en el escenario de desmielinización cortical crónica, el
00: 21: 57.10 Las células positivas para NogoA, así como las células positivas para Olig2, fueron
00:22: 02.22 muy abajo. Sin embargo, en lesiones anteriores, oligodendroglia
00:22: 07.07 Las densidades eran mucho mejores, e incluso mejores de lo normal.
00:22: 13.11 Así que incluso una estimulación de las densidades de oligodendroglia. Sin embargo,
00:22: 18.17 Creo que todavía nos falta el conocimiento sobre los modos y también el
00:22: 22.26 momento de la muerte celular. Y probablemente nuestras terapias no deberían
00:22: 27.17 Espere demasiado, pero si es posible, apunte a las lesiones anteriores.
00:22: 35.22 Un gran paso adelante con respecto a nuestro objetivo de estimular
00: 22: 42.02 terapias pro-remielinizantes es sin duda la detección de remielinización
00: 22: 47.17 de mielina in vivo. Y ahí, creo que en los últimos años, lo importante
00:22: 52.06 Se han hecho avances con las imágenes PET. Y este es un estudio por este medio
00:22: 58.11 Bruno Stankoff que estoy mostrando aquí desde París, quien sigue
00: 23: 02.10 a los pacientes y luego identifica las lesiones individuales e identifica
00:23: 06.16 básicamente reparación de mielina, remielinización en estos pacientes. Y creo que esto lo hará
00: 23: 13.02 será muy útil para el futuro. Por un lado, para establecer
00: 23: 17.17 el efecto protector de neuronas y axones de la remielinización, y
00: 23: 22.19 por otro lado, como una lectura in vivo de nuestro pro-remielinativo
00: 23: 26.18 terapias. Entonces, para resumir lo que he dicho, la EM es patológicamente muy
00: 23: 35.06 característica. Muestra una característica lesión centrífuga. Todavía tenemos que
00: 23: 41.07 identificar lo que realmente subyace a esta lesión específica, o patrón de lesión
00: 23: 45.29 formación. Además, sin embargo, son sustancialmente difusos y no focales.
00: 23: 50.12 patología. Y también correlatos inflamatorios y no inflamatorios
00:23: 54.19 de la enfermedad progresiva, y aún no se comprenden completamente.
00:23: 58.06 Y realmente necesitamos saber más sobre eso para poder
00: 24: 02.13 para tratar este aspecto de la enfermedad en nuestros pacientes. También los patomecanismos
00:24: 07.19 del daño de la mielina y la muerte de los oligodendrocitos aún no se comprenden completamente.
00:24: 11.05 Y, como Mika también mencionó, la remielinización es eficaz solo en
00:24: 16.23 una pequeña proporción, aproximadamente el 20%, de los pacientes.
00: 24: 20.26 Entonces, claramente identificaría como objetivos de investigación para mejorar aún más
00:24: 27.08 nuestra comprensión de la patogénesis de la EM y la evolución de las lesiones.
00: 24: 30.02 Para demostrar también formalmente el efecto neuroprotector de
00: 24: 33.29 remielinización, idealmente in vivo utilizando las nuevas tecnologías de imagen.
00: 24: 37.28 Y luego también desde el lado biológico celular, para identificar los medios para
00: 24: 43.16 proteger y estimular las OPC en la EM en evolución y establecida
00: 24: 48.06 lesiones. Con eso, por supuesto, me gustaría agradecer a todas las personas que contribuyeron
00:24: 53.08 este trabajo, ya ti por escuchar. Muchas gracias.

  • Parte 1: mielinización, remielinización y esclerosis múltiple

Los pacientes con leucemia linfocítica crónica (LLC) que progresaron temprano con ibrutinib a menudo desarrollan transformación de Richter (RT) con una supervivencia corta de aproximadamente 4 meses. Los estudios preclínicos sugieren que la vía de muerte programada 1 (PD-1) es fundamental para inhibir la vigilancia inmunitaria en la CLL. Este estudio de fase 2 fue diseñado para probar la eficacia y seguridad de pembrolizumab, un anticuerpo bloqueador de PD-1 humanizado, a una dosis de 200 mg cada 3 semanas en CLL en recaída y transformada. Se inscribieron veinticinco pacientes, incluidos 16 CLL en recaída y 9 pacientes con RT (todos con linfoma difuso de células grandes comprobado), y el 60% recibió ibrutinib previamente. Se observaron respuestas objetivas en 4 de 9 pacientes con RT (44%) y en 0 de 16 pacientes con CLL (0%). Todas las respuestas se observaron en pacientes con RT que habían progresado después de una terapia previa con ibrutinib. Después de una mediana de seguimiento de 11 meses, la mediana de supervivencia general en la cohorte de RT fue de 10,7 meses, pero no se alcanzó en los pacientes de RT que progresaron después de la administración previa de ibrutinib. Se informaron eventos adversos de grado 3 o superior relacionados con el tratamiento en 15 (60%) pacientes y fueron manejables. Los análisis de muestras tumorales previas al tratamiento de los pacientes disponibles revelaron un aumento de la expresión del ligando 1 de PD (PD-L1) y una tendencia a un aumento de la expresión de PD-1 en el microambiente tumoral en pacientes que habían confirmado respuestas. En general, pembrolizumab mostró una eficacia selectiva en pacientes con CLL con RT. Los resultados de este estudio son los primeros en demostrar el beneficio del bloqueo de PD-1 en pacientes con CLL con RT, y podrían cambiar el panorama de la terapia para los pacientes con RT si se validan más. Este ensayo se registró en www.clinicaltrials.gov como # NCT02332980.

El panorama del tratamiento de la leucemia linfocítica crónica (LLC) recidivante ha cambiado con la introducción de nuevos inhibidores de señales, incluido el inhibidor de la tirosina quinasa de Bruton ibrutinib, el inhibidor de PI3Kδ idelalisib y el inhibidor del linfoma de células B 2 (BCL-2) venetoclax. 1-4 A pesar de los resultados clínicos mejorados, los pacientes con CLL continúan progresando con el tiempo, 1 y los pacientes con CLL que progresaron temprano mientras recibían ibrutinib a menudo desarrollaron transformación de Richter (RT), una transformación en linfoma agresivo. Hasta la fecha, los pacientes con CLL que desarrollaron RT mientras recibían ibrutinib tienen una supervivencia general (SG) muy corta (~ 4 meses) 5,6 y esto presenta una necesidad clínica insatisfecha.

Las interacciones de la muerte programada 1 (PD-1) con sus ligandos representan un importante punto de control inmunológico comprometido por las células tumorales para superar la vigilancia inmunitaria activa de las células T. Los anticuerpos monoclonales de inmunoglobulina G4 (IgG4) humanizados diseñados para bloquear las interacciones entre PD-1 y sus ligandos han mostrado una actividad clínica significativa en los tumores sólidos metastásicos 7-12 y el linfoma de Hodgkin (HL), 13 pero aún no se han estudiado exhaustivamente en la CLL en recaída. o RT.

Han surgido pruebas acumuladas con respecto a la expresión de PD-1 y sus ligandos en varios tipos de no HL (NHL), incluida la CLL. 14-18 Las células T efectoras o efectoras de memoria agotadas en pacientes con CLL sobreexpresan PD-1 y son defectuosas para formar sinapsis inmunes con las células B leucémicas. 19-21 La incubación del anticuerpo bloqueador de PD-1 con células T de CLL restablece la sinapsis inmunitaria normal entre las células T periféricas y las células leucémicas de CLL. 19-21 Los datos recientes han revelado que el bloqueo de la vía PD-1 con el anticuerpo PD-ligando 1 (PD-L1) anulará la progresión de la enfermedad de CLL en un modelo de ratón de CLL (Tcl-1 transgénico). 22,23 Los datos clínicos preliminares demostraron la eficacia del anticuerpo PD-1 en cánceres hematológicos seleccionados, incluidos los LBC grandes difusos (DLBCL) 24,25 y otros LNH. 25,26

Dados los datos anteriores, planteamos la hipótesis de que el bloqueo de las interacciones de PD-1 con sus ligandos superaría la evasión inmune en pacientes con CLL y RT en recaída. Para probar esta hipótesis, llevamos a cabo un ensayo clínico de fase 2 iniciado por un investigador (# NCT02332980) para evaluar la seguridad y la actividad clínica del anticuerpo bloqueador de PD-1 pembrolizumab en CLL recidivante o refractaria y NHL de células B de bajo grado (folicular , zona marginal y linfoma linfoplasmocítico). También incluimos el uso de pembrolizumab en RT porque alrededor del 50% de los pacientes con RT tienen alteración de TP53 que típicamente se asocia con inestabilidad genómica, 27,28 y los cánceres con altas cargas de mutaciones somáticas / complejidad genómica tienden a responder al bloqueo de PD-1. 29 Aquí, informamos los resultados en la cohorte de CLL de este ensayo de fase 2, incluidos los pacientes con CLL con RT.


Parte 2: Células madre y tumores cerebrales

00: 00: 01.21 Hola. Mi nombre es Alfredo Quiñones-Hinojosa. Soy un profesor asociado
00: 00: 05.21 de Neurocirugía, Oncología, Medicina Celular y Molecular y Neurociencia
00: 00: 10.07 en la Universidad Johns Hopkins.
00: 00: 12.11 Hoy, tengo el placer de hablarles sobre el tema de las células madre y los tumores cerebrales.
00: 00: 18.11 La pregunta es si hay o no una celda
00: 00: 24.20 que ha dado lugar a un cáncer de cerebro,
00: 00: 29.11 y si esa célula era o no una célula madre neural normal
00: 00: 33.10 que ha dado lugar a un tumor cerebral,
00: 00: 36.10 o si había o no una célula madre de tumor cerebral
00: 00: 40.13 población dentro del cáncer de cerebro.
00: 00: 42.21 Y vamos a seguir adelante y explorar esto.
00: 00: 45.02 Les contaré un poco sobre la historia.
00: 00: 47.08 En mi opinión, el órgano más hermoso del cuerpo es el cerebro,
00: 00: 50.15 y esta es una reconstrucción tridimensional de una resonancia magnética.
00: 00: 53.05 Y lo que no ves aquí mismo
00: 00: 56.28 es que, en el lado izquierdo del cerebro, que es esta área aquí mismo -
00: 01: 01.01 recuerde que la imagen está volteada.
00: 01: 03.20 Hemos hecho esto, aquí mismo, ya sabes, en este caso la etiqueta L para la izquierda
00: 01: 08.29 y estás mirando, a ti mismo, a este cerebro, cara a cara,
00: 01: 12.00 así. Este es el lado izquierdo. Detrás de esto,
00: 01: 15.08 es un tumor cerebral muy peligroso,
00: 01: 18.12 también conocido como glioblastoma multiforme.
00: 01: 21.12 Hace más de 100 años, Santiago Ramón y Cajal ganó el Premio Nobel de Fisiología y Medicina
00: 01: 27.07 porque pudo contribuir enormemente al campo de la neurociencia
00: 01: 31.27 mirando los diferentes tipos de células que forman el cerebro.
00: 01: 37.00 Dijo que teníamos un duro decreto
00: 01: 40.27 que todo puede morir, y nada puede ser regenerado en el sistema nervioso central adulto.
00: 01: 47.08 Dejó abierta la posibilidad de enfermedades patológicas.
00: 01: 52.03 Era patólogo de formación y se convirtió en uno de los grandes neurocientíficos del mundo.
00: 01: 58.20 Durante los próximos 30-40 minutos, les contaré algo de la historia
00: 02: 04.11 de la controversia sobre la neurogénesis adulta,
00: 02: 06.19 la diferencia entre el nicho de células madre humanas y las de roedores -
00: 02: 13.00 más específicamente, la zona subventricular.
00: 02: 16.09 Me ocuparé de si se encuentran o no células madre
00: 02: 21.20 en el cerebro humano, y si
00: 02: 24.08 hay células madre que se encuentran en el cáncer humano.
00: 02: 29.03 La pregunta que aún permanece es si una célula madre neural o una célula madre
00: 02: 34.18 puede dar lugar a una célula madre de tumor cerebral, y eso es un trabajo en progreso,
00: 02: 40.01 y me extenderé un poco sobre eso.
00: 02: 43.11 ¿Qué pasa con este tema de la controversia de la neurogénesis adulta?
00: 02: 46.20 Bueno, resulta que se remonta a principios del siglo XX,
00: 02: 51.15 Santiago Ramón y Cajal sabía que teníamos limitaciones en tecnología.
00: 02: 56.07 Dijo una vez que ninguno de los métodos utilizados por estos investigadores
00: 02: 59.22 son capaces de distinguir absolutamente una célula de neuroglia en multiplicación
00: 03: 07.06 de una pequeña neurona mitótica.
00: 03: 10.03 Entonces, la pregunta es si hubo o no nuevas neuronas
00: 03: 13.01 formándose en el cerebro de un mamífero adulto.
00: 03: 16.27 Para la década de 1960, Joseph Altman, al hacer un estudio con evidencia autorradiográfica de timidina,
00: 03: 26.26 pudo encontrar nuevas neuronas en la rata y el gato adultos.
00: 03: 33.25 Pero, unos años más tarde, en la década de 1970,
00: 03: 37.12 cuando Michael Kaplan, combinó el etiquetado de timidina
00: 03: 41.18 y microscopía electrónica. Esta es la primera investigación y la primera utilización
00: 03: 48.02 de microscopía electrónica que confirmó las afirmaciones de Altman
00: 03: 53.16 mostrando precursores neuronales mitóticos que recubren el ventrículo lateral.
00: 03: 59.05 Pero la gente seguía siendo muy escéptica.
00: 04: 02.11 Fue un poco difícil de entender y de creer
00: 04: 05.26 que de hecho, se están produciendo nuevas neuronas en el ventrículo lateral del cerebro de los mamíferos.
00: 04: 11.29 En la década de 1980, Nottebohm y sus colegas, de Nueva York,
00: 04: 16.23 fueron, haciendo algunos estudios realmente elocuentes
00: 04: 20.17 en el cerebro aviar, pudieron, a través de una serie de experimentos, mostrar varias cosas.
00: 04: 27.15 La producción de nuevas células con marcaje de timidina.
00: 04: 31.28 Pudieron demostrar que estas nuevas células no eran solo neuronas,
00: 04: 36.05 pero también estaban recibiendo sinapsis.
00: 04: 38.22 Y lo más importante, estas neuronas que estaban recibiendo sinapsis
00: 04: 42.23 respondió al sonido con potencial de acción.
00: 04: 46.24 Sin embargo, la gente se mostró muy escéptica sobre el tema
00: 04: 52.07 de la neurogénesis en el cerebro aviar
00: 04: 55.14 porque dijeron que no era el cerebro de los mamíferos.
00: 04: 58.10 Entonces, en la década de 1990, trabajar en el roedor,
00: 05: 01.21 de varios laboratorios alrededor del mundo, comenzaron a deshacerse
00: 05: 06.16 y enséñanos más sobre este tema sobre la controversia de la neurogénesis.
00: 05: 11.08 Para 1997, un grupo de investigadores liderado por el Dr. Arturo Alvarez-Buylla,
00: 05: 17.14 también fuera de Nueva York y posteriormente fuera de California,
00: 05: 21.11 pudo dilucidar la organización y la citoarquitectura
00: 05: 26.18 de la zona subventricular de roedores.
00: 05: 29.14 Pero 1999, un descubrimiento muy importante que también fue controvertido ...
00: 05: 34.23 varios grupos creían que probablemente había células ependimarias
00: 05: 37.28 que eran responsables de las neuronas. Y Arturo y su grupo,
00: 05: 42.11 creyendo que en realidad eran astrocitos, pudieron mostrar
00: 05: 46.00 que las células madre neurales adultas provienen en realidad de astrocitos en el cerebro de los roedores.
00: 05: 52.12 Lo que no se sabía en este momento
00: 05: 55.29 era si esto también era cierto para el cerebro humano.
00: 06: 00.03 Era aún menos conocida la diferencia en este nicho de células madre -
00: 06: 04.29 la zona subventricular - entre el humano y el roedor.
00: 06: 09.22 Y esa es la siguiente parte de esta discusión.
00: 06: 12.12 Varios años después, para el año 2003-2004,
00: 06: 19.04 ya que Arturo y su grupo, y yo mismo involucrado en algunos de estos estudios,
00: 06: 23.15 comenzamos a desentrañar algunos de los misterios de la organización
00: 06: 28.28 de la zona subventricular humana.
00: 06: 31.20 Empezamos a mirar los marcadores de migración, en este caso,
00: 06: 35.20 PSANCAM y marcadores de proliferación, KI67,
00: 06: 40.15 y marcadores de precursores neuronales, TuJ1.
00: 06: 44.14 Y miramos varias partes del cerebro.
00: 06: 47.07 Este es el cuerno anterior, el cuerpo del ventrículo,
00: 06: 49.19 las otras partes del ventrículo, como puede ver,
00: 06: 53.01 todo el camino hasta el cuerno temporal, aquí en la parte inferior.
00: 06: 56.07 Y lo que puedes ver, en realidad, no solo la organización
00: 07: 00.09 era diferente: había evidencia de proliferación, migración,
00: 07: 03.20 pero también encontramos evidencia de algunas neuronas luchando
00: 07: 07.18 en esta área de la zona subventricular,
00: 07: 10.21 subiendo y bajando.
00: 07: 12.18 Entonces, después de muchos años de observar la organización
00: 07: 15.12 de la zona subventricular de roedores, realizado por muchos grupos en los Estados Unidos
00: 07: 19.22 y el mundo,
00: 07: 20.10 comenzamos a mirar la organización de la zona subventricular humana.
00: 07: 25.05 Y realmente puedes ver aquí. en rojo
00: 07: 27.18 es GFAP y en azul es DAPI.
00: 07: 30.11 Para la zona subventricular de roedores, en realidad puede ver
00: 07: 33.22 GFAP en verde, doble cortina en rojo y DAPI en azul.
00: 07: 38.10 Y luego hay una ilustración de dibujos animados entre la zona subventricular humana
00: 07: 43.06 y la zona subventricular de roedores.
00: 07: 45.17 En la zona subventricular de los roedores, el cerebro no solo está un poco más
00: 07: 49.16 lisencefálico en escultura. Eso significa que tiene menos surcos.
00: 07: 53.18 en comparación con el cerebro humano. Pero, en el área de la zona subventricular -
00: 07: 57.20 esa es la pared lateral del ventrículo aquí mismo.
00: 07: 59.15 Esto es una amplificación. De hecho, puedes ver un grupo de celdas
00: 08: 03.12 acaba de salir. También conocida como corriente migratoria rostral.
00: 08: 07.11 Y estos astrocitos están completamente soldados contra la zona epyndemal.
00: 08: 12.16 Sin embargo, en el cerebro humano, está la zona epyndemal aquí mismo,
00: 08: 16.12 que se llama capa 1. Entonces la capa 2 es un espacio hipocelular.
00: 08: 20.03 Entonces la capa 3 es una cinta de astrocitos.
00: 08: 23.08 Y luego hay una transición al parénquima.
00: 08: 26.15 Grandes diferencias entre la organización de la zona subventricular humana
00: 08: 31.04 y la zona subventricular de roedores.
00: 08: 34.06 Entonces, nos interesamos en nuestro laboratorio para dilucidar más
00: 08: 37.28 la organización de la zona subventricular humana.
00: 08: 40.20 Continuamos haciendo estos estudios muy similares en el cerebro humano fetal.
00: 08: 46.17 Y de hecho, parece ser que el ventrículo lateral también puede estar conectado
00: 08: 52.00 hasta la corriente migratoria rostral, todo el camino hacia abajo
00: 08: 55.18 contra el bulbo olfativo. Este es un llamado
00: 08: 57.17 sección sagital a lo largo de esta región que es ligeramente oblicua aquí mismo
00: 09: 02.23 y un poco inclinado, como puedes ver
00: 09: 04.04 aquí mismo, y pudimos estudiar diferentes regiones de esta parte del cerebro,
00: 09: 09.18 tratando de entender cómo están organizados el cerebro fetal y el cerebro humano
00: 09: 15.16 en comparación con el cerebro de los roedores.
00: 09: 18.28 ¿Existe una población de células que están migrando?
00: 09: 22.09 Resulta que encontramos alguna evidencia de que efectivamente
00: 09: 26.18 hay algunas células que parecen estar migrando fuera de esta región.
00: 09: 31.03 No necesariamente de la misma manera en que parecen estar migrando en el cerebro de los roedores,
00: 09: 36.07 desde el ventrículo hasta el bulbo olfatorio,
00: 09: 39.00 pero de hecho algunas de estas células parecen estar migrando en grupos,
00: 09: 43.06 y están rodeados por estas células gliales. Esta es una microscopía confocal
00: 09: 47.23 de tal región en el cerebro fetal humano,
00: 09: 51.02 y desafortunadamente, nuestro grupo, no ha podido encontrar evidencia
00: 09: 55.19 de un tipo similar de migración en el cerebro humano
00: 09: 58.27 per se, en el cerebro humano adulto,
00: 10: 02.09 pero otros grupos alrededor del mundo han afirmado que esto sí existe.
00: 10: 06.14 Entonces la pregunta es, si existe migración en el cerebro humano,
00: 10: 10.05 ¿Podríamos aprender algo sobre esa migración?
00: 10: 13.27 que nos ayudará a entender por qué los tumores cerebrales son tan migratorios?
00: 10: 18.02 Esta es una imagen que les mostraré de un pequeño trozo de cerebro fetal humano
00: 10: 23.03 que se pone en Matrigel, en el que verás evidencia de células migratorias
00: 10: 27.23 rodeado de láminas gliales.
00: 10: 30.07 Y esta es la imagen, aquí mismo. Esta es la pelicula.
00: 10: 32.21 En realidad, puede ver, esto es de nuestro propio laboratorio, células que migran,
00: 10: 36.21 y este es el cerebro fetal humano.
00: 10: 38.07 Están emigrando y están rodeados.
00: 10: 42.05 Y hemos hecho todas estas inmunotinciones para poder ver eso, de hecho,
00: 10: 45.26 el cerebro fetal humano puede tener algunas similitudes con respecto a la migración
00: 10: 51.13 en comparación con el cerebro de los roedores.
00: 10: 55.05 Hemos realizado estudios similares, como se puede imaginar, con tumores cerebrales humanos
00: 10: 59.15 y estamos en el proceso de tratar de desentrañar algunos de los misterios
00: 11: 03.16 que los tumores cerebrales humanos utilizan para la migración.
00: 11: 07.04 Te llevaré. Entonces, hemos repasado la controversia de la neurogénesis adulta.
00: 11: 11.26 y creo que está claro que el cerebro de los mamíferos tiene la capacidad
00: 11: 16.00 para generar algunas neuronas, al menos en el cerebro de los roedores.
00: 11: 18.29 Y evidencia similar puede ser cada vez más clara
00:11: 23.25 en el cerebro humano adulto.
00: 11: 26.00 Sabemos que el nicho de las células madre, en este caso la zona subventricular,
00: 11: 30.09 es diferente entre el humano y el roedor.
00: 11: 33.04 La pregunta es si existen o no células madre
00: 11: 36.09 en el cerebro humano, y si hay o no células madre en el cáncer humano.
00:11: 40.03 Entonces, ¿podría ser que haya células madre neurales adultas humanas?
00: 11: 45.02 En la década de 1990, Steve Goldman y sus colegas, hicieron varios estudios
00: 11: 49.11 y publicó un artículo sobre cómo encontrar la neurogénesis adulta
00: 11: 53.24 de la zona subventricular del cuerno temporal in vitro.
00:11: 57.11 Esto fue por cirugías del cuerno temporal, en las que hicieron resecciones del lóbulo temporal.
00: 12: 04.12 y pudimos cultivar este tejido y crear neuronas
00: 12: 07.10 por primera vez, lo que demuestra que de hecho, al menos en la placa de Petri,
00: 12: 11.06 es posible.
00: 12: 12.12 En la década de 1990, Gage y sus colegas, mostraron un estudio
00: 12: 16.08 mirando cerebros post-mortem - lo llaman in vivo, pero post-mortem -
00:12: 22.08 en el que mostraron neurogénesis en el hipocampo humano adulto.
00:12:27 11 Y estoy en el lado derecho del hipocampo ahora mismo.
00:12: 29.28 Estoy mostrando una imagen específica y lo que realmente puedes ver.
00: 12: 33.06 aquí mismo, en esta celda en particular aquí que está marcada
00: 12: 37.02 con dos marcadores: el rojo es NeuN como puede ver aquí
00: 12: 41.13 y el verde es BrdU, por lo que parece ser la formación de una neurona.
00:12: 46.19 Estos pacientes habían recibido BrdU para el tratamiento de otras enfermedades.
00:12: 51.29 Fallecieron, y este grupo pudo obtener sus cerebros.
00: 12: 56.09 y haz estos estudios. Por primera vez,
00:12: 59.01 congelando estos tejidos a tiempo, pudieron encontrar evidencia de nuevas neuronas
00: 13: 04.14 formándose en el hipocampo humano adulto.
00: 13: 09.14 Entonces, nos hacemos las mismas preguntas.
00: 13: 13.14 Para 2004, preguntamos - publicamos un artículo en el que nos hicimos las preguntas:
00:13: 18.09 ¿La zona subventricular humana adulta podría tener células madre neurales?
00: 13: 24.07 De hecho, obtuvimos las muestras de la sala de operaciones.
00: 13: 27.22 Observamos específicamente especímenes de la zona subventricular,
00:13: 31.08 y pudimos formar estas hermosas y pequeñas esferas.
00:13: 35.11 Las llamábamos neuroesferas.
00:13: 37.05 Purificamos estos astrocitos de la zona subventricular.
00: 13: 41.09 Eso significa que, a través de un procedimiento, agitamos las células,
00: 13: 44.07 y al final, en la placa de Petri,
00: 13: 46.07 solo dejamos astrocitos. Y pudimos crear aún más
00: 13: 50.25 neuroesferas en comparación con aquellos episodios en los que no purificamos los astrocitos.
00:13: 56.23 Y obtuvimos astrocitos de la corteza y el cuerpo estriado.
00:14: 01.05 No teníamos absolutamente ninguna evidencia de formación de esferas,
00:14: 04.14 diciéndonos por primera vez que de hecho tiene que haber algo peculiar
00: 14: 08.12 en los astrocitos que se encuentran en la zona subventricular,
00: 14: 12.15 porque no solo cuando los purificamos
00: 14: 15.01 encontramos más neuroesferas, pero
00: 14: 19.02 también cuando tenemos los mismos astrocitos o astrocitos similares de la corteza y el cuerpo estriado,
00:14: 24.10 No encontramos evidencia de neuroesferas.
00:14: 26.17 Esta es la imagen de una de esas neurosferas.
00: 14: 29.26 Y no solo eso, cuando los pusimos en un medio especial, pudimos formar
00: 14: 35.07 los 3 linajes: en este caso, neuronas,
00: 14: 37.20 en este caso oligodendrocitos, como puede ver aquí mismo,
00: 14: 41.24 y astrocitos. Entonces, desde una de estas esferas,
00: 14: 45.06 de la zona subventricular,
00: 14: 47.05 encontramos la capacidad de estas celdas -
00:14: 50.24 esta es una esfera que vino de una sola célula que era un astrocito.
00: 14: 55.08 Era una célula positiva para GFAP,
00:14: 57.25 y diferenciamos las células, pudimos producir 3 linajes. Una vez más,
00: 15: 03.09 astrocitos, neuronas y oligodendrocitos.
00: 15: 07.11 Pero eso no fue suficiente. La pregunta era lata
00: 15: 10.25 astrocitos de la zona subventricular humana
00: 15: 14.10 ¿producir neuronas sin el efecto de los factores de crecimiento?
00: 15: 19.06 Entonces, lo que hicimos aquí, es brindar un ambiente
00: 15: 22.19 en el que usamos astrocitos del cerebro humano,
00: 15: 25.24 y luego obtuvimos un astrocito de la zona subventricular,
00: 15: 30.23 y lo dejamos aquí
00: 15: 32.14 para ver si, sin poner factores de crecimiento exógenos,
00: 15: 37.06 en realidad podríamos producir una neurona.
00: 15: 40.00 Y estoy dentro de uno de estos experimentos, y realmente puedes ver
00: 15: 42.24 en rojo, una hermosa neurona que se ha formado a partir de un astrocito
00: 15: 48.03 que se derivó de la zona subventricular
00: 15: 50.15 sin el uso de factores de crecimiento.
00: 15: 52.25 Intentamos hacer lo mismo con los astrocitos corticales y estriatales,
00: 15: 57.27 y no pudimos producir una neurona.
00: 16: 00.25 Una vez más, diciéndonos que hay algo sobre los astrocitos subventriculares
00: 16: 05.25 que hace que esas células sean peculiares y capaces
00: 16: 09.25 para producir neuronas en el cerebro humano real.
00:16: 13.14 Ahora, todo esto se hizo en la placa de Petri,
00: 16: 17.18 y, sin embargo, pudimos encontrar, por primera vez,
00: 16: 21.19 que en la región del ventrículo lateral,
00: 16: 24.06 como puede ver aquí, hay
00:16: 26.04 varias regiones - esto fue en realidad después de estudiar una gran cantidad de especímenes,
00: 16: 30.29 no solo del quirófano, sino también del tejido post-mortem,
00: 16: 36.03 pudimos encontrar que en el ventrículo lateral
00: 16: 38.25 del cerebro humano, hay una población específica de astrocitos
00: 16: 43.23 que puede dar lugar, no solo a esas hermosas esferas,
00: 16: 47.16 sino también a las neuronas, oligodendrocitos y astrocitos,
00: 16: 51.17 y lo más importante, incluso sin factores de crecimiento, podemos
00: 16: 56.06 producen una sola neurona.
00:16: 58.12 Entonces, de hecho, existe la posibilidad, hasta el presente,
00: 17: 02.19 lo que no sabíamos antes, que el cerebro humano
00: 17: 05.16 en la placa de Petri, tiene la capacidad de producir neuronas.
00:17: 10.03 Entonces, probablemente haya una población celular que llamamos células madre.
00: 17: 15.19 dentro de esta área de la zona subventricular.
00: 17: 18.01 Otros grupos han seguido observando esta población de células dentro del hipocampo,
00:17: 25.01 y continúan avanzando en este campo.
00:17: 28.11 ¿Qué pasa con el problema de las células madre en el cáncer humano?
00:17: 31.22 Eso es algo que obviamente ha sido uno de los mayores desafíos.
00: 17: 36.17 que hemos tenido, porque el cáncer sigue siendo la enfermedad más devastadora
00: 17: 40.29 conocido por los humanos. En mi opinión, el órgano más bello
00:17: 45.22 afectados por el cáncer más devastador.
00: 17: 50.04 Uno de los problemas que tenemos, en primer lugar,
00: 17: 52.24 es que estamos lidiando con tumores que provienen del cerebro,
00:17: 56.13 los llamados tumores intraaxiales.
00: 17: 58.12 Podemos tener todo el camino desde gliomas de bajo grado (LGG)
00: 18: 02.03 a gliomas de alto grado (HGG).
00: 18: 05.10 Grados bajos a altos. Todos pertenecen a la misma familia de cánceres.
00: 18: 09.05 Todo el camino desde el grado bajo hasta el grado alto.
00: 18: 11.07 Creo que cuanto menor es el grado, mayor es la supervivencia del paciente.
00: 18: 15.11 Cuanto más alto sea el grado, más devastador es para el paciente.
00: 18: 20.07 Las limitaciones son que potencialmente en cirugía podemos resecar
00: 18: 26.19 esta masa que podemos ver en el quirófano.
00: 18: 30.27 El problema es que cuando estos pacientes reciben el diagnóstico de cáncer de cerebro,
00: 18: 35.00 específicamente si se trata de un glioma de alto grado,
00:18: 37.23 muchas células han migrado hasta la parte contralateral del cerebro.
00:18: 44.19 Y les digo que así de devastador es un asesinato en masa.
00: 18: 48.29 Aproximadamente 20,000 personas en los Estados Unidos son diagnosticadas recientemente
00: 18: 54.02 con el cáncer de cerebro primario.
00:18: 57.20 Ese es el cáncer que les acabo de mostrar.
00:18: 59.13 Ese es un cáncer que proviene específicamente del cerebro.
00: 19: 02.28 Y aproximadamente la mitad de esos pacientes mueren cada año
00: 19: 07.08 como resultado de estos tumores malignos.
00:19: 10.06 Eso es específicamente los gliomas, ese es el tipo de tumor del que estamos hablando.
00:19: 15.22 Hemos analizado este problema en nuestro laboratorio.
00: 19: 18.13 Sabes, estaba interesado en tratar de entender si había o no una relación
00: 19: 22.18 entre el glioblastoma multiforme y el ventrículo lateral.
00:19: 26.24 Entonces, recuerde, estudiamos los ventrículos laterales en el cerebro humano normal,
00: 19: 30.04 y sabemos que existe una población potencial de
00:19: 32.19 células que llamamos células madre.
00:19: 34.16 Entonces, ¿estas células madre potenciales pueden dar lugar a estos tumores?
00:19: 38.13 Bueno, tenemos que dar un paso a la vez.
00: 19: 40.26 Entonces, lo que hicimos fue volver a nuestra base de datos en Johns Hopkins,
00: 19: 45.05 y miramos el porcentaje de supervivencia
00: 19: 48.28 y los meses, aquí mismo, y observamos dos tipos de pacientes:
00: 19: 53.18 los que involucraron la zona subventricular,
00: 19: 55.27 que es la línea oscura aquí,
00: 20: 00.29 como realmente puede ver.
00: 20: 02.03 Y luego miramos a los pacientes que no tenían afectación de la zona subventricular.
00: 20: 06.24 Y esta es esta línea de puntos de aquí.
00: 20: 09.28 Y miramos la supervivencia. Lo que notamos son esos pacientes
00: 20: 13.13 que tienen tumores que están involucrados en la zona subventricular,
00: 20: 16.21 que es este de aquí, que es este tipo de tumor aquí,
00: 20: 20.03 sobrevivió solo 8 meses.
00: 20: 23.17 Frente a aquellos pacientes que no tenían compromiso de la zona subventricular,
00:20: 28.10 que es este tipo de tumor, aquí mismo, no cerca del ventrículo aquí mismo.
00: 20: 32.23 Esos pacientes tienden a sobrevivir 11 meses. Y esta es la curva de Kaplan-Meier.
00: 20: 38.01 Entonces, por primera vez, dándonos una idea de que potencialmente dentro de esta área,
00: 20: 43.18 puede haber una población que esté contribuyendo
00: 20: 47.08 o potencialmente originando algunos de estos tumores.
00: 20: 50.16 Esa sigue siendo una hipótesis de trabajo.
00: 20: 52.18 La hipótesis de trabajo es sencilla.
00: 20: 56.00 ¿Cómo se forman los tumores?
00: 20: 57.14 ¿Los tumores provienen de la transformación de una célula madre neural
00: 21: 02.00 o una célula progenitora neural que luego se transforma
00:21: 05.14 en una célula madre de un tumor cerebral y luego da lugar a estos tumores devastadores.
00:21: 10.17 ¿Existen alteraciones epigenéticas y genéticas que den lugar a esta transformación?
00: 21: 16.24 ¿Existe una posible desdiferenciación
00: 21: 20.06 entre una neurona, un astrocito o un oligodendrocito dando lugar
00:21:25.04 a estas células progenitoras neurales, que a su vez dan lugar
00:21: 29.14 ¿a una célula madre de un tumor cerebral?
00:21: 31.21 Eso es trabajo en progreso.
00:21: 34.13 La conclusión es que estos tumores aquí
00: 21: 37.10 son devastadores, y la forma en que estamos viendo ahora el potencial
00: 21: 41.10 etiología por transformación de células madre neurales o células progenitoras
00:21: 45.27 dar lugar a estas células madre de tumores cerebrales es absolutamente
00: 21: 50.12 dándonos la esperanza de que potencialmente algún día
00:21: 55.02 Podremos manipular el sistema y tener un efecto positivo en nuestros pacientes.
00: 22: 00.22 Les muestro, lo que sucedió en 2004, cuando publicamos nuestro artículo
00: 22: 04.20 en Nature, que también muestra que los humanos tienen en el ventrículo lateral
00:22: 08.25 estas células madre neurales que dan lugar a neuronas
00:22: 12.06 contribuyendo a nuestra comprensión de la zona subventricular humana.
00:22: 16.01 Casi al mismo tiempo, un grupo de Italia y un grupo de Canadá,
00:22: 21.16 demostraron que, de hecho, cuando obtenemos tejido de
00:22: 24.27 el quirófano, y obtenemos los tumores, y luego los cultivamos.
00:22: 28.23 Tumores, ya sea como pequeñas esferas, las llamadas neuroesferas,
00:22: 33.23 se ven exactamente como las neuroesferas, pero se llaman tumoresesferas.
00:22: 37.14 O aislamos estas células en base a CD133.
00:22: 42.24 Y seguimos adelante y volvemos a poner las esferas o las células
00:22: 47.06 en el cerebro de los roedores, estos cerebros de roedores producen tumores
00:22: 52.13 que se ve exactamente como el tumor del paciente.
00:22: 56.03 Y desde entonces, otros grupos (incluyéndonos a nosotros)
00:22: 59.02 de hecho han duplicado algunos de esos estudios.
00:23: 01.27 Entonces, por primera vez, dándonos la esperanza de que de hecho
00: 23: 06.11 al final, potencialmente estos tumores pueden ser estudiados
00:23: 13.05 cuando obtenemos el tejido del paciente y lo llevamos al laboratorio.
00:23: 17.22 Entonces, por primera vez, comenzamos a hacer que nuestros pacientes sean parte no solo del diagnóstico,
00: 23: 22.07 sino también el tratamiento potencial
00:23: 24.08 y haciéndolos parte de la historia.
00:23: 26.07 Estos tumores se ven mucho mejor y se parecen mucho mejor
00: 23: 30.24 el tumor original que algunas de las líneas celulares que hemos usado
00:23: 33.26 desde hace varias décadas.
00:23: 35.16 Ahora, hay similitudes entre las células madre neurales
00: 23: 39.24 y las células madre del tumor cerebral,
00: 23: 41.16 desde las capacidades migratorias hasta la señalización.
00:23: 45.12 Y puedes ver algunas de estas similitudes aquí mismo.
00:23: 48.22 ¿Qué hace que las células madre de los tumores cerebrales sean peculiares?
00:23: 52.23 es el hecho de que parecen tener una propagación mucho más a largo plazo, así como
00:23: 57.16 etiquetado fenotípico dual. Eso significa que
00:23: 59.10 en realidad pueden marcar con varios marcadores.
00:24: 02.17 Ahora, esto es potencialmente lo que nos hace pensar que
00:24: 08.08 tal vez células madre neurales, tienen que hacer algo con las células madre de tumores cerebrales.
00:24: 12.15 Una vez más, esta es una hipótesis de trabajo que creo que potencialmente en el futuro,
00:24: 17.11 seremos capaces de empezar a comprender un poco más de forma sistemática.
00: 24: 23.00 Lo que sí sabemos hoy es que desde la zona subventricular,
00: 24: 26.27 de estos astrocitos, podemos formar estas esferas, y estas esferas pueden a su vez
00:24: 32.10 dan lugar a los tres linajes: neuronas, oligodendrocitos y astrocitos,
00:24: 36.13 que puedes ver aquí mismo.
00: 24: 38.00 Lo que sí sabemos hoy es que si obtenemos tejido del quirófano
00: 24: 43.01 de nuestros pacientes, ya que podemos hacer crecer una sola célula
00:24:46.15 en una esfera, y esa esfera finalmente puede volver al animal,
00:24: 51.03 esos tumores se parecen al tumor que tenía originalmente el paciente.
00:24: 56.10 Entonces, potencialmente dándonos la oportunidad de tener una mejor
00: 25: 00.21 modelo para estudiar el cáncer de cerebro, y eso es exactamente lo que hemos hecho
00: 25: 05.14 en nuestras colaboraciones, parte de nuestro trabajo.
00:25: 07.13 Y repasaré un par de estos estudios.
00: 25: 09.09 Por ejemplo, este es un artículo que publicamos no hace mucho,
00: 25: 13.21 en realidad en 2009, donde miramos el tipo Delta / Notch
00: 25: 19.09 receptor relacionado con el factor de crecimiento epidérmico.
00:25: 21.26 Estos son tumores que se derivaron de neuroesferas de glioblastoma multiforme.
00:25: 27.05 Y, como puede ver aquí mismo, este es el tumor
00: 25: 30.09 sin tratamiento. Este es el tumor con tratamiento.
00:25: 34.28 En este caso, aquí mismo, este es el valor del tumor, que en realidad puede ver aquí.
00: 25: 39.29 Estos son los dos grupos diferentes, y en realidad puedes
00:25: 42.09 Veamos diferencias significativas.
00:25: 44.10 Una vez más, ilustrando el principio de que podemos soñar con manipular el sistema.
00: 25: 52.23 y muy sistemáticamente comienzan a comprender cuáles son los factores de crecimiento, los receptores,
00:25: 59.06 que influyen en la formación de este tumor.
00:26: 02.15 Te llevaré a través de otro estudio que hemos hecho.
00: 26: 05.10 que es la familia de factor de transcripción 9 similar a Kruppel,
00: 26: 10.21 un factor de transcripción asociado a la diferenciación que
00: 26: 14.08 suprime la señalización de Notch I e inhibe las células madre que inician el glioblastoma.
00:26: 20.16 Esta es la imagen real aquí. Este es el control.
00:26: 23.29 Puedes ver el tumor masivo, similar al tumor del paciente,
00:26: 28.14 y cuando tratamos estos tumores,
00: 26: 30.18 para este factor específicamente, puede ver mucha menos formación de tumores
00:26: 38.16 en el animal, en el modelo de roedor.
00:26: 41.10 Y realmente puedes ver aquí mismo, en este eje
00: 26: 45.25 no es nada más, pero la diferencia significativa real entre el control
00:26: 50.27 y los tratados con respecto al tamaño del tumor aquí mismo.
00:26: 54.23 Y aquí está el Kaplan-Meier para la supervivencia de estos dos grupos.
00:26: 59.17 Ese es el control y los animales que son tratados.
00:27: 02.26 Y es una diferencia significativa, una vez más nos da
00:27: 05.24 la esperanza de que podamos aprender de esta enfermedad, de la que podamos aprender
00:27: 10.13 estas células, que lo que aprendemos de estas células o de estos fallecidos
00: 27: 14.29 puede potencialmente aplicarse algún día a nuestros pacientes,
00:27: 19.06 dándonos esta vista.
00:27: 20.06 Y los dejo con este último trabajo de PNAS.
00:27: 23.02 que acabamos de publicar hace unos meses, en el que miramos
00: 27: 26.15 señalización de c-Met induciendo una red de reprogramación
00: 27: 30.25 y apoyando un fenotipo similar a un tallo de glioblastoma.
00:27: 32.16 Y realmente puedes ver el control - tumor muy grande
00:27: 36.04 y los tratados aquí, dándonos el área del tumor.
00:27: 39.29 La diferencia entre estos dos aquí.
00:27: 41.27 Una vez más, por primera vez, nos da la capacidad de manipular el sistema.
00:27: 46.27 Creo que, ahora a través de los estudios, no solo nuestro grupo, sino otros grupos de todo el mundo
00:27: 51.18 están haciendo en estas esferas. en estas esferas tumorales,
00:27:55.20 que cuando se vuelven a colocar en animales, esos tumores se parecen al tumor original,
00:27: 59.14 seremos capaces de desentrañar los misterios, la señalización,
00: 28: 05.05 las características que tienen estos tumores, y un día
00: 28: 07.19 podremos producir nuevas terapias que tendrán un efecto en nuestros pacientes.
00:28: 14.29 Entonces, concluyo diciéndoles que hay
00:28: 18.08 neurogénesis adulta en el cerebro de los mamíferos.
00:28: 21.18 Hay un nicho de células madre, específicamente la zona subventricular,
00:28: 26.01 que es diferente entre el cerebro humano y el de mamífero roedor.
00: 28: 30.23 Y esa es en realidad una diferencia muy importante, porque
00:28: 33.16 a lo largo de los años. a lo largo de décadas,
00: 28: 37.03 hemos continuado estudiando la formación de tumores
00:28: 39.24 en el cerebro de los roedores - formación de tumores de roedores en el cerebro de los roedores.
00:28: 45.05 Y creo que sigue siendo una necesidad hacerlo
00: 28: 48.19 para continuar desentrañando algunos de los mecanismos comunes
00:28: 51.01 que el cerebro de los roedores puede tener con el cerebro humano.
00:28: 53.25 Pero también creo que es muy, muy importante
00:28: 57.12 que seguimos investigando tejidos humanos,
00:29: 02.20 y eso se debe a que hay diferencias notables entre el humano y el roedor,
00:29: 08.13 y tenemos que tratar de entender de ambos al mismo tiempo.
00:29: 12.06 Sí existen. Las células madre existen
00:29: 17.13 en el cerebro humano. Lo sabemos. Lo hemos hecho nosotros mismos.
00: 29: 21.24 Otros grupos. Existen en la zona subventricular, al menos en la placa de Petri.
00:29: 26.03 Existen en el hipocampo, y eso es algo muy, muy importante a tener en cuenta.
00: 29: 31.04 para que comprendamos y usemos esta capacidad
00: 29: 34.09 para la futura medicina regenerativa.
00:29: 36.21 Las células madre también existen en el cáncer humano,
00: 29: 40.26 y estamos empezando a desentrañar los misterios
00:29: 43.12 y las formas de manipular este sistema actualmente.
00:29: 47.23 Aún no se sabe si las células madre neurales dan lugar a tumores.
00:29: 52.21 Creo que esta es una hipótesis de trabajo.
00: 29: 55.28 Lo que se conoce es una población de células dentro de los tumores
00:29: 59.18 que se comportan como células madre.
00: 30: 02.02 Y esto es realmente muy, muy importante para que podamos entender
00: 30: 06.00 no solo la etiología, sino la posible progresión del cáncer de cerebro.
00: 30: 11.00 Creo que el futuro es brillante,
00: 30: 14.08 y continuaremos con la búsqueda para encontrar la etiología
00: 30: 19.07 de los tumores cerebrales, por lo que potencialmente algún día,
00: 30: 22.20 podremos encontrar mejores formas de tratar a nuestros pacientes.
00: 30: 28.00 Muchas gracias. Agradezco a todas las personas que han apoyado nuestro trabajo.
00: 30: 32.02 a lo largo de los años, incluidos los NIH, Howard Hughes,
00: 30: 35.06 el Fondo de Investigación de Células Madre del Estado de Maryland.
00: 30: 39.20 Y lo más importante, agradezco a mi grupo.
00: 30: 43.14 Este es un grupo de jóvenes científicos que han permitido
00: 30: 45.13 para aprender de ellos y me permitió enseñarles un poco de lo que sé,
00: 30: 50.03 y juntos, estamos tratando de encontrar esperanza para nuestros pacientes.
00: 30: 54.01 Tengo el trabajo más hermoso del mundo.
00: 30: 55.17 Todos los días trabajo no solo como neurocirujano,
00: 30: 58.02 dar esperanza a mis pacientes en el quirófano,
00: 31: 00.25 pero con suerte, dándoles esperanza también fuera del quirófano.
00: 31: 04.21 Muchas gracias.

  • Parte 1: Tumores cerebrales

Pacientes, materiales y métodos

Pacientes

Los pacientes elegibles eran VIH seropositivos por Western blot, tenían linfoma de células B agresivo (clasificación de la Organización Mundial de la Salud), tenían una función orgánica adecuada a menos que se debiera a un tumor y no recibieron tratamiento. 19 Los pacientes con infecciones que impiden el tratamiento o con linfoma primario del sistema nervioso central no fueron elegibles. Los pacientes se inscribieron consecutivamente entre abril de 1995 y agosto de 2000. La junta de revisión institucional del Instituto Nacional del Cáncer aprobó el protocolo y todos los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito.

Tratamiento y valoración

EPOCH se administró durante 6 ciclos durante el día 1 al día 5 como una infusión continua de 96 horas de etopósido, doxorrubicina y vincristina (sin tapón), y prednisona oral con ciclofosfamida el día 5 como se describe en la Tabla 1. Para reducir la incidencia de toxicidad hematológica, la dosis de ciclofosfamida en el ciclo 1 se basó en el número de células CD4 + del paciente al ingresar al estudio (Tabla 1). Posteriormente, la ciclofosfamida se ajustó hacia arriba o hacia abajo en incrementos de 187 mg / m 2 (dosis máxima de 750 mg / m 2) para lograr un nadir absoluto de neutrófilos de aproximadamente 500 células / mm 3. La vincristina se redujo por toxicidad como se describió previamente. 6,8 Ningún paciente recibió tratamiento antirretroviral durante DA-EPOCH. El tratamiento antirretroviral se inició inmediatamente después del último ciclo de DA-EPOCH y cumplió con los estándares de atención.

EPOCH con dosis ajustada

Droga. Dosis . Ruta. Días de tratamiento.
Agentes infundidos *
Etopósido 50 mg / m 2 / día CIV 1,2,3,4 (96 horas)
Doxorrubicina 10 mg / m 2 / día CIV 1,2,3,4 (96 horas)
Vincristina † 0,4 mg / m 2 / día CIV 1,2,3,4 (96 horas)
Agentes en bolo
Ciclofosfamida (ciclo 1)
Células CD4 + ≥ 100 / mm 3 375 mg / m 2 / día IV 5
Células CD4 + & lt 100 / mm 3 187 mg / m 2 / día IV 5
Ajuste de dosis de ciclofosfamida (después del ciclo 1) ‡
nadir ANC & gt 500 / μL ↑ 187 mg por encima del ciclo anterior
nadir ANC & lt 500 / μL o plaquetas & lt 25000 / μL ↓ 187 mg por debajo del ciclo anterior
Prednisona 60 mg / m 2 / día correos 1,2,3,4,5
Filgrastim 5 μg / kg / día CAROLINA DEL SUR 6 → ANC & gt 5000 / μL (pasado nadir)
Siguiente ciclo§ Día 21
Droga. Dosis . Ruta. Días de tratamiento.
Agentes infundidos *
Etopósido 50 mg / m 2 / día CIV 1,2,3,4 (96 horas)
Doxorrubicina 10 mg / m 2 / día CIV 1,2,3,4 (96 horas)
Vincristina † 0,4 mg / m 2 / día CIV 1,2,3,4 (96 horas)
Agentes en bolo
Ciclofosfamida (ciclo 1)
Células CD4 + ≥ 100 / mm 3 375 mg / m 2 / día IV 5
Células CD4 + & lt 100 / mm 3 187 mg / m 2 / día IV 5
Ajuste de dosis de ciclofosfamida (después del ciclo 1) ‡
nadir ANC & gt 500 / μL ↑ 187 mg por encima del ciclo anterior
nadir ANC & lt 500 / μL o plaquetas & lt 25000 / μL ↓ 187 mg por debajo del ciclo anterior
Prednisona 60 mg / m 2 / día correos 1,2,3,4,5
Filgrastim 5 μg / kg / día CAROLINA DEL SUR 6 → ANC & gt 5000 / μL (pasado nadir)
Siguiente ciclo§ Día 21

Los datos son para el ciclo 1, excepto donde se indique en "Ajuste de dosis de ciclofosfamida". - representa no aplicable.

Se pueden mezclar etopósido, doxorrubicina y vincristina en la misma solución. El etopósido, la doxorrubicina y la vincristina nunca se ajustan en dosis por toxicidad hematológica.

La dosis de vincristina nunca debe limitarse de forma rutinaria.

Dosis basada en el nadir del recuento absoluto de neutrófilos (ANC) del ciclo anterior (CBC BIW) dosis máxima de ciclofosfamida 750 mg / m 2.

Comience el día 21 si RAN ≥ 1000 / μL y plaquetas ≥ 50000 / μL.

En este estudio, estábamos interesados ​​en evaluar los efectos de la interleucina 12 (IL-12) sobre la reconstitución inmune y el control del linfoma. Se ha demostrado que la IL-12 promueve el subtipo funcional TH-1 de células CD4 +, que está significativamente disminuido en pacientes infectados por VIH. 20,21 In vitro, IL-12 restaura algunas funciones inmunológicas deprimidas asociadas al VIH, lo que sugiere que la producción defectuosa de IL-12 puede desempeñar un papel patógeno en la inmunodeficiencia de la infección por VIH. 22 La IL-12 también ha mostrado efectos antitumorales significativos en un sistema modelo murino que era dependiente de las células T citotóxicas CD8. 23 Para evaluar los efectos clínicos de IL-12, 20 pacientes consecutivos que lograron una respuesta completa fueron aleatorizados para recibir 300 ng / kg de IL-12 dos veces a la semana mediante inyección subcutánea durante 3 meses o ninguna terapia adicional. Se obtuvieron en serie muestras de sangre periférica para evaluar la función inmunológica. Esta aleatorización tuvo un poder del 80% y α = .05 bilateral para detectar una diferencia de desviación estándar de 1.3 en las proporciones medias de Th-1 / Th-2 entre los 2 brazos.

La profilaxis del sistema nervioso central para el linfoma, administrada a los últimos 17 pacientes, fue de 12 mg de metotrexato intratecal el día 1 y el día 5 de los ciclos 3 a 6. Los pacientes con linfoma activo del sistema nervioso central recibieron tratamiento de acuerdo con el siguiente paradigma: tratamiento - intratecal o metotrexato intraventricular o metotrexato / citarabina / prednisona dos veces por semana durante 2 semanas más allá de la citología negativa y la citometría de flujo, durante un mínimo de 4 semanas de consolidación; una vez a la semana durante 6 semanas de mantenimiento; una vez al mes durante 6 meses. Los pacientes que no respondieron al metotrexato como agente único recibieron citarabina. La radiación craneal se utilizó según la indicación clínica en los fracasos de la quimioterapia. Ningún paciente recibió radiación en otros sitios. Pneumocystis La profilaxis de la neumonía se administró durante DA-EPOCH y se interrumpió después del tratamiento si las células CD4 + eran más de 200 / mm 3. Mycobacterium avium Se administró profilaxis compleja a pacientes con células CD4 + menores de 100 / mm 3 y se suspendió después de DA-EPOCH en la recuperación.

La evaluación inicial incluyó análisis de sangre de rutina, imágenes cerebrales y corporales, biopsia de médula ósea y punción lumbar. Se realizó una evaluación después de los ciclos 4 y 6 y después del tratamiento. Las respuestas tumorales fueron de acuerdo con los criterios del Taller Internacional. Se combinaron los criterios de valoración de respuesta completa y respuesta completa sin confirmar.

Análisis molecular e inmunohistoquímico

Se realizaron análisis inmunohistoquímicos tumorales en tejidos incluidos en parafina disponibles utilizando anticuerpos contra CD20, CD10, MIB-1, bcl-2, bcl-6, p53 (Dako, Carpenteria, CA) y MUM-1 / IRF-4 (obsequio de B. Falini). El virus de Epstein-Barr (EBV) se detectó mediante hibridación in situ contra EBER-1 en las células tumorales. Todos los análisis inmunohistoquímicos se realizaron en el Laboratorio de Patología del Instituto Nacional del Cáncer y se puntuaron según lo descrito previamente por el mismo investigador (S. P.). 17

Después de la desparafinización, los portaobjetos se sometieron a un procedimiento de recuperación de antígeno (en tampón de citrato 10 mM, pH 6,0, en una olla a presión apta para microondas y se calentaron en el microondas durante 40 minutos a 700 W) y luego se realizó la inmunohistoquímica en un inmunostainer automático (Ventana Medical System, Tucson , AZ) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. p53 se consideró positivo si más del 10% de las células tumorales tenían tinción nuclear. Se corrió un portaobjetos de control junto con los estuches para confirmar la idoneidad de la tinción. Para bcl-2, la intensidad de la tinción se comparó con las células T de control presentes en las muestras de tumor. Si este último no se tiñó, el caso se calificó como insatisfactorio. La tinción para bcl-2 se puntuó de la siguiente manera: 0, las células tumorales fueron negativas, pero las células T reactivas intercaladas fueron positivas 1, las células tumorales se tiñeron más claro que las células T 2, las células tumorales se tiñeron igual que las células T 3, las células tumorales se tiñeron más fuerte que la T células. Las células tumorales se consideraron positivas para bcl-2 si se puntuaron como superiores o iguales a 1. MUM-1 se consideró positivo si había más del 20% de tinción nuclear de las células neoplásicas. 17 La tinción de MIB-1 se puntuó como un percentil medio de 200 células tumorales promediadas en 3 campos de alta potencia (hpf 40 ×), o en casos con una cantidad mínima de tejido como un percentil medio de todas las células neoplásicas y se informó como 0% a 100%.

Análisis inmunológico y viral

Se obtuvieron en serie cargas virales de ARNm del VIH-1 en plasma, incluidos el día 1 y el día 6 de cada ciclo en los primeros 8 pacientes. Las cargas virales se midieron inicialmente mediante amplificación basada en secuencias de ácidos nucleicos (NASBA), y luego mediante el método de Roche-Amplicor. 25 Ambos métodos tienen una sensibilidad y un rango dinámico similares. La genotipificación de la transcriptasa inversa del VIH-1 se realizó en serie en 9 pacientes como se describió anteriormente. 26

Los subconjuntos de linfocitos T se determinaron en serie mediante citometría de flujo.En 8 pacientes, se midieron en serie los subconjuntos CD4 + CD45RO + (comprometidos) y CD4 + CD45RA + CD62L (sin tratamiento previo) CD4 +. Para los pacientes en la porción de IL-12 del estudio, las células mononucleares sanguíneas se obtuvieron al inicio, mensualmente 3 y 6 a 12 meses después de DA-EPOCH para la producción de citocinas estimuladas por fitohemaglutinina (PHA), incluido el interferón gamma (Biosource International, Camarillo, CA) e interleucina 10 (Pierce Endogen, Rockford, IL), utilizando kits comerciales de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas.

Análisis estadístico

Las probabilidades de supervivencia general y supervivencia libre de progresión se calcularon mediante el método de Kaplan-Meier a partir de la fecha del estudio hasta la muerte, la progresión por linfoma o el último seguimiento, según corresponda. 27 Los pacientes fueron censurados para la supervivencia libre de progresión del linfoma si desarrollaron segundas neoplasias malignas o murieron sin linfoma. Además, todas las muertes se consideraron fracasos, independientemente de la causa. La supervivencia libre de enfermedad se calculó desde la fecha del estudio hasta la progresión o el último seguimiento de los pacientes que lograron una remisión completa de la enfermedad. La significación de la diferencia entre pares de curvas de Kaplan-Meier se calculó mediante el procedimiento de Mantel-Haenszel. 28

La supervivencia libre de progresión de los pacientes con tumores bcl-2 negativos en el presente estudio se comparó con los pacientes con tumores bcl-2 negativos de un estudio del Instituto Nacional del Cáncer de DA-EPOCH en pacientes VIH negativos con DLBCL. 8 La comparación de la distribución de las características entre los pacientes del presente estudio y los del ensayo anterior de DA-EPOCH se realizó con la prueba exacta de Fisher o la prueba de chi-cuadrado, según corresponda, y los resultados se presentan sin ajuste para comparaciones múltiples. .

El modelo de riesgos proporcionales de Cox se utilizó para identificar el efecto de los factores de pronóstico previos al tratamiento sobre el resultado e incluyó linfoma del sistema nervioso central, edad, estadio, estado funcional del Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG), número de sitios extraganglionares, lactato deshidrogenasa (LDH), puntuación del índice pronóstico (IPI) y recuento de CD4 +. 29 Solo aquellos factores que se asociaron con una significación estadística marginal o mejor (es decir, con PAG value & lt .05) fueron finalmente evaluados en el modelo de Cox. En vista del número limitado de pacientes en este estudio, los modelos de Cox y asociados PAG Los valores estaban pensados ​​para ser interpretados como generadores de hipótesis y sugerentes de magnitud en lugar de absolutos. Todos PAG los valores son de 2 colas y se indican como PAG2.


Imágenes inquietantes muestran a la esposa tratando de luchar contra su marido matón antes de que él la arrojara por la ventana del cuarto piso

ESTA imagen inquietante muestra a una esposa tratando desesperadamente de luchar contra su marido matón antes de que él la estrangulara hasta la muerte y arrojara su cuerpo por una ventana.

La abogada Tatiane Spitzner fue presuntamente atacada brutalmente por su esposo en un ascensor antes de ser estrangulada y luego arrojada desde un apartamento del cuarto piso en Brasil.

La policía ha publicado las imágenes de sus momentos finales en los que fue sometida a niveles impactantes de agresión por parte de Luis Felipe Manvailer.

El jueves pasado, los investigadores forenses publicaron su informe que concluyó que el abogado no murió a causa de una caída, sino que fue estrangulado mientras se encontraba en el apartamento de la pareja.

El cadáver ensangrentado y roto de la víctima de 29 años fue encontrado dentro del apartamento de la pareja en Guarapuava, sur de Brasil, el 22 de julio.

La policía sospechaba que el profesor universitario de biología de 32 años había matado a su esposa de cinco años después de agredirla brutalmente, pero afirmó que discutieron y ella murió después de arrojarse por el balcón de su apartamento.

Sus hallazgos sugieren que Tatiane tuvo un final violento y murió asfixiada mientras intentaba desesperadamente defenderse. Las huellas de un par de manos estaban en su garganta, y el hueso hioides, ubicado en la parte frontal del cuello, estaba fracturado, una lesión comúnmente asociada con estrangulamiento.

La abogada también sufrió múltiples fracturas en el resto de su cuerpo consistentes con una caída de 40 pies sobre un pavimento de concreto. Según el informe, no había "evidencia de ninguna reacción química", como rastros de adrenalina y cortisol en su cuerpo, que indicaran miedo y conciencia de caer en picado.

Ya estaba muerta cuando cayó al suelo, dijeron los investigadores.

Las pruebas también indicaron niveles significativos de alcohol en la sangre de la víctima y la sangre "lo que sugiere que era bastante vulnerable", dijeron los expertos forenses.

Las imágenes de CCTV capturadas en un estacionamiento subterráneo y un ascensor revelan que intentó escapar repetidamente. Unos 20 minutos después de entrar en su apartamento, se registra al sospechoso subiendo el cuerpo sin vida de la víctima en el ascensor y aparentemente limpiando los rastros de sangre de las paredes.

“Nuestra investigación demuestra que la víctima fue asesinada dentro del departamento por asfixia y su cuerpo fue arrojado por el balcón del departamento.

"Creemos que el acusado tomó el ascensor hasta la planta baja y recogió el cuerpo de Tatiane, llevándolo de regreso al apartamento en el ascensor", dijo la fiscal penal Dunia Rampazzo.

“Sospechamos que antes de que la mataran, Luis sometió a su esposa a un período prolongado de agresión física violenta. Esto no fue un suicidio, sino un feminicidio (el asesinato de una mujer por un hombre debido a su género). Luego, el agresor intentó escapar en automóvil ".

Los residentes del edificio, que llamaron a la policía después de escuchar a una mujer pidiendo ayuda a gritos, informaron haber visto a un hombre recoger el cuerpo de la víctima del pavimento. Un testigo relató haberlo escuchado gritar "mi amor, despierta".

La policía afirmó que Manvailer admitió haber subido el cuerpo en el ascensor al piso. Las imágenes de seguridad lo muestran luego huyendo de la escena en un automóvil.

Fue arrestado bajo sospecha de asesinato a unas 185 millas (300 km) de la ciudad después de estrellarse en una autopista y afirmó que huyó porque estaba "demasiado perturbado" por las "imágenes de su esposa saltando" para quedarse.

Los resultados de la autopsia llegan casi dos meses después de que ocurriera el horrible crimen.

En ese momento, su muerte causó indignación nacional y provocó un debate a nivel nacional sobre el abuso doméstico y la vulnerabilidad de las mujeres en un país donde 1.133 fueron víctimas de feminicidio en 2017. Según el Foro Brasileño de Seguridad Pública, el año pasado, un promedio de 530 mujeres reportaron sufrir violencia doméstica por día.

Los expertos forenses explicaron que la investigación criminal tomó "más de los 30 días previstos porque es un caso complicado". Se realizaron tres simulaciones que examinan la dinámica de la caída del abogado desde el cuarto piso donde vivía la pareja.

En la operación se utilizó un muñeco del mismo peso y altura de la víctima que se dejó caer desde diferentes ángulos probando varias posibilidades de cómo ocurrió la caída.

Un registro angustioso de las escenas que llevaron a la muerte del abogado da una idea gráfica del abuso doméstico que sufrió.

Amigos cercanos de la víctima afirman que ella reveló en una serie de mensajes de texto, enviados muchos meses antes de su muerte, que tenía "miedo" de su marido, a quien acusó de "maltratarla", y que quería el divorcio.

Sin embargo, el abogado defensor del marido argumentó que la pareja tenía una relación "feliz".

Según los informes, la pareja estaba saliendo por la noche cuando comenzaron a discutir sobre las imágenes de una mujer encontradas en el teléfono de Manvailer.

Las cámaras de seguridad en el condominio del centro de la ciudad donde vivían, documentaron un relato golpe a golpe del incidente que comienza con un automóvil que se detiene frente al edificio.

Imágenes impactantes muestran al especialista en artes marciales de Jiu-jitsu aparentemente abofeteando a su esposa varias veces en la cara en el vehículo mientras intenta luchar contra él.

La violencia repugnante continúa en el estacionamiento subterráneo con la víctima siendo agredida físicamente, pateada, estrangulada, perseguida a través de un estacionamiento subterráneo y dentro del ascensor donde es brutalmente golpeada, dominada y restringida mientras intenta desesperadamente escapar.

Lo que no se ve son los 15 minutos de presunta brutalidad dentro del departamento de la pareja. Pero poco después de que la pareja llegara a su apartamento, un cuerpo cae al suelo fuera del edificio. Las cámaras muestran al acusado presuntamente introduciendo el cuerpo de la víctima en el ascensor.

El sospechoso sostiene su cabeza en aparente desesperación. Luego se lo ve presuntamente limpiando rastros de sangre de las paredes del ascensor.


Ver el vídeo: Por qué ENVEJECEMOS? La Hiperactina (Noviembre 2022).